饮用水中大肠埃希菌富集和DNA提取方法优化
目的 建立一种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合,以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测.方法 膜过滤洗脱环节,采用3种不同的方法进行富集洗脱,通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果;DNA提取环节,采用4种方法进行DNA提取.所得DNA进行实时荧光PCR扩增,定量检测DNA拷贝数,比较各方法的DNA提取效率;并采用最优的方法组合,对模拟水样进行膜过滤和DNA提取,考察全过程的回收率和灵敏度.结果 采用加表皮葡萄球菌过滤+漩涡混合器+玻璃棒刮擦洗脱方法(C法),洗脱效率能达到75％～93％;TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度(100 ～ 10-5),r2分别为0.998和0.999,然而,TritonX-100法更省时,更简便,经济性更好.采用该最优的方法组合,其全过程的回收率为79.7％ ～ 104.0％且灵敏度达到1 cfu/ml.结论 C法+Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取.
大肠埃希菌、细菌富集、DNA提取、饮用水、食品安全、食源性致病菌
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R155.5;R446.5(营养卫生、食品卫生)
江苏省卫生厅预防医学2012年科研课题资助项目Y2012049;苏州市饮用水安全与水性疾病监测公共服务平台开放实验室开放课题资助项目SZPT2012001
2014-03-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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