鳗鲡疱疹病毒基础RPA及RPA-LFD检测方法的比较

摘要：

[目的]鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus,AngHV)是鳗鲡"脱黏败血综合征"的主要病原,对鳗鲡养殖产业造成了严重的经济损失.为达到早期预警和防止病毒扩增蔓延的目的,建立一套AngHV快速检测技术对中国鳗鲡养殖疾病防控具有重要意义.[方法]本研究根据AngHV ORF55 设计了扩增引物和探针,建立了基于重组酶聚合酶等温扩增技术(RPA)的基础RPA及RPA侧向流层析试纸条法(RPA-LFD)检测方法,探究了不同时间和温度对基础RPA和RPA-LFD扩增效果的影响,并比较了 2 种方法的灵敏度、特异性和临床应用效果.[结果]本研究建立的AngHV基础RPA及RPA-LFD快速检测方法扩增产物大小为 394 bp;2 种检测方法都仅需 20～40 min即可完成检测过程;温度的变化对检测方法的影响不大,37～43℃范围内均能得到较好的扩增效果;2 种检测方法均与鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus)和鲤疱疹病毒(Cyprinid herpesvirus)无交叉反应,表现出良好的特异性;RPA-LFD检测方法具有更高的检测灵敏度,检出限至1.32×100 copies/mL,基础RPA检出限至 1.32×103 copies/mL;检测实验室保存的 20 份鳗鲡病料DNA,2 种方法检测的结果一致,阳性率均为 30%,表明AngHV基础RPA和RPA-LFD检测方法均具有良好的临床应用潜力.[结论]AngHV基础RPA和RPA-LFD检测方法十分适用于基层科研单位、鳗鲡产品加工场及养殖场的病毒检测,丰富了AngHV检测手段的可选性.

关键词：鳗鲡、鳗鲡疱疹病毒(AngHV)、重组酶聚合酶等温扩增(RPA)、重组酶聚合酶等温扩增-侧向流层析试纸条法(RPA-LFD)

所属期刊栏目：46

分类号：S943(水产保护学)

资助基金：福建省属公益类科研院所基本科研专项;国家大宗淡水鱼类产业技术体系项目;福建省属公益类科研院所基本科研专项

在线出版日期：2024-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：367-374