筛选核酸以寻找核苷酸变异的方法

摘要：

本发明提供了一种方法用于在初始核酸中探测核苷酸变异，包括在存在修饰核苷酸的条件下产生一系列以初始核酸为模板的单链延伸产物。这些延伸产物中含有修饰的核苷酸并借此抑制核酸外切酶对于3’末端核苷酸碱基的活性。这些延伸产物有着不同的长度，把它们与参照核酸杂交，并使用一种酶作用于杂交的核酸。当存在选择性标记核苷酸的条件下，可用该酶切除并替换延伸产物的3’末端核苷酸。这样，那些在3’末端处无法与参照核酸对应位置杂交的延伸产物在相应的位置被替换以一个或多个可以与参照核酸杂交的核苷酸，这样就可以把在3’末端可与参照核酸杂交的和不可与参照核酸杂交的延伸产物区别开来，并由此探测初始核酸的核苷酸变异。本发明还提供了这一方法的变型，利用它可以探测出单链延伸产物3’端倒数第二个碱基的突变。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN99812395.1

申请日期：1999-08-18

公开/公告号：CN1324410

公开/公告日：2001-11-28

主分类号：C12Q1/68

申请/专利权人:遗传检测公司

发明/设计人:P·A·达尔豪泽

主申请人地址:美国田纳西州

专利代理机构:中国专利代理(香港)有限公司

代理人:卢新华%谭明胜

国别省市代码:美国;US

权利要求：

权利要求书1．一种在初始核酸中探测核苷酸变异的方法，包括：a)在存在修饰核苷酸的条件下，产生一系列以初始核酸为模板的单链延伸产物，其中这些延伸产物掺入了修饰的核苷酸并借此限制核酸外切酶对3’末端核苷酸碱基的外切活性，其中这些延伸产物有着不同的长度；b)把这些不同长度的单链延伸产物与参照核酸杂交；c)在存在选择性标记的核苷酸的条件下，使用一种酶作用于杂交的核酸，该酶可切除并替换延伸产物的3’末端核苷酶，其中，那些3’末端无法与参照核酸相应位置杂交的延伸产物被替换以一个可与参照核酸杂交的核苷酸，这样就可以把在3’末端可与参照杂交的和不可与参照核酸杂交的延伸产物区别开来；d)区别那些3’末端不杂交的和3’末端杂交的延伸产物，借此检测初始核酸中的核苷酸变异。