无细胞嵌合体制备技术和异源双螺旋突变载体的真核应用

摘要：

本发明是以重组诱发性寡核苷酸在含有胞质提取物和质粒上的待测双螺旋DNA的无细胞系统中的反应为基础。在转化的MutS、RecA缺陷型细菌中，所述反应特异性地将突变kan^r基因转变恢复成抗性表型，从而能够迅速并定量地比较重组诱发性寡核碱基。利用该系统，一种被称为异源双螺旋突变载体的双螺旋突变载体类型比此前检测的突变载体类型更有活性。此外，通过核酸酶抗性寡核苷酸例如四－2’－O－甲基－尿苷代替四胸苷连接物连接双螺旋突变载体的两条链并除去含DNA的插入片段可以提高活性。权利要求涉及含上述改进的双螺旋突变载体。在另一实施方案中，权利要求涉及含重组诱发性寡核碱基、无细胞酶混合物和含靶序列的双螺旋DNA的反应混合物。在另一实施方案中，本发明涉及利用这种混合物在检测重组诱发性寡核碱基的改进以及检测所述化合物对无细胞酶混合物活性的影响和在靶DNA序列中产生特异性改变方面的应用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN99808545.6

申请日期：1999-05-12

公开/公告号：CN1309717

公开/公告日：2001-08-22

主分类号：C12N15/87

申请/专利权人:金默拉根有限公司

发明/设计人:E·B·克米克;H·B·加姆佩尔;A·D·科勒－斯特劳斯

主申请人地址:美国宾夕法尼亚州

专利代理机构:中国专利代理(香港)有限公司

代理人:张广育%谭明胜

国别省市代码:美国;US

权利要求：

权利要求书1．用于修饰DNA序列的无细胞组合物，含有：a．含靶序列的双螺旋DNA；b．以所述DNA序列为靶并编码其修饰物的重组诱发性寡核碱基，c．具有链转移活性的无细胞酶混合物。