在丝状真菌突变细胞中生产多肽的方法

摘要：

本发明涉及一种以提高的量生产多肽的方法，它包括：(a)在适合生产该多肽的营养培养基中培养亲代丝状真菌细胞的突变体，其中，(i)该突变细胞包含一条编码该多肽的第一种核酸序列和编码DDC2和／或DDC3多肽的一条或多条第二种核酸序列的修饰，或其同源物，以及(ii)当在相同条件下培养时，该突变细胞比亲代细胞生产更多的多肽；以及(b)从该突变细胞的营养培养基回收所述多肽。本发明还涉及所述第二种核酸序列，由该第二种核酸序列编码的多肽，以及包含该序列的核酸构建物、重组表达载体和宿主细胞。本发明进一步涉及丝状真菌细胞的突变体和获得该突变细胞的方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN99806230.8

申请日期：1999-05-14

公开/公告号：CN1301307

公开/公告日：2001-06-27

主分类号：C12N15/80

申请/专利权人:诺沃诺尔迪斯克生物技术有限公司%诺沃挪第克公司

发明/设计人:J·瓦勒斯尼尔;T·克瑞斯特森

主申请人地址:美国加利福尼亚

专利代理机构:中国国际贸易促进委员会专利商标事务所

代理人:郭建新

国别省市代码:美国;US

权利要求：

1．一种生产多肽的方法，它包括：(A)在有助于生产该多肽的条件下培养亲代丝状真菌细胞的突变细胞，其中，当在相同条件下培养时，所述突变细胞比亲代细胞生产更多的多肽，其中，所述突变细胞包含一条编码该多肽的第一种核酸序列以及一条或多条选自下组的第二种核酸序列的修饰：(ⅰ)编码具有一种氨基酸序列的多肽的核酸序列，所述氨基酸序列具有至少50％与序列2的氨基酸19～64或序列5的氨基酸21～83的同一性；(ⅱ)具有至少50％与序列1的核苷酸1014～1151或序列4的核苷酸1041～1229的同源性的核酸序列；(ⅲ)一条核酸序列，它在低严格性条件下与如下物质杂交：(a)序列1的核苷酸1014～1151或序列4的核苷酸1041～1229，(b)至少100个核苷酸的(a)的子序列，或者(c)(ⅰ)或(ⅱ)的互补链；(ⅳ)一条编码多肽的变体的核酸序列，所述多肽具有一条序列2或序列5的氨基酸序列，所述变体包括一个或多个氨基酸的替代、缺失和/或插入；(ⅴ)(ⅰ)、(ⅱ)或(ⅲ)的等位变体；以及(ⅵ)(ⅰ)、(ⅱ)、(ⅲ)或(ⅴ)的子序列，其中，该子序列编码具有DDC2或DDC3多肽活性的多肽片段；以及(B)从所述突变细胞的培养基回收所述多肽。