抗食管癌细胞核仁抗原单抗及食管癌诊断试剂及其制备
本发明涉及抗食管癌细胞核仁抗原单抗及食管癌诊断试剂及其制备方法。在制备了抗食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体后，进一步做成食管癌诊断试剂盒。应用抗食管癌细胞核仁单克隆抗体，可用来检测人肿瘤细胞相关核仁抗原的存在，作为判断恶性肿瘤的标志；也可用来在肿瘤患者治疗前后，应用该抗体检测人恶性肿瘤相关核仁抗原阳性细胞比率的变化，对治疗效果及预测复发提供依据。食管癌诊断试剂同样能对恶性肿瘤治疗效果的评价提供敏感方法和指标，并可用来进行对恶性肿瘤的流行病学调查。其诊断结果准确，诊断时间早。
发明专利
CN99117127.6
1999-10-08
CN1291656
2001-04-18
C12P21/08
中国医科大学科技开发部
刘乐和
510089广东省广州市中山二路74号
广州三环专利代理有限公司
程跃华
广东;44
权利要求书1．一种抗食管癌细胞核仁抗原单抗的制备，包括如下步骤：(1)食管癌细胞核基质的提取；(2)杂交瘤细胞株的建立；(3)单克隆抗体提纯；其特征在于食管癌细胞核基质的提取过程为：将食管癌组织用预冷0．01MPH7．4PBS浸过，洗去残留血迹，用手术剪，在冰浴上将组织剪碎，用PBS悬浮，置玻璃匀浆器中，匀浆3～5分钟，悬液通过不锈钢网，离心收集细胞，4℃800g离心10分钟，去上清，加入10倍于沉淀体积的提取液A即0．25M蔗糖、100mMNaCl、50mMKCl、20mMTris-HCl、1mMPMSF、1％NP-40、PH7．4溶液悬浮后置于30毫升玻璃匀浆器中，冰浴中匀浆5-10分钟，取少量悬液于干净玻璃片上，用0．1％亚甲基蓝染色，加盖玻片镜下观察，当有大量细胞核游离即90％以上时，将悬浮液缓慢沿着管壁加入装有四分之一管提取液B即0．5M蔗糖、其余组分同提取液A的溶液垫底的Eppdrof管中，4℃400g离心10分钟，小心去除上清，将沉淀转移至含有10毫升提取液C即2M NaCl、0．01M Tris-HCl、10mM PMSF、0．02mM2-ME、pH值7．4溶液的玻璃匀浆器内，缓慢抽提至细胞核悬液不再粘稠，约2小时，将悬浮液缓慢加入有三分之一管提取液D即1．8M蔗糖、其余组分同提取液C的溶液垫底的塑料离心管中，4℃95000g离心100分钟，小心去除上清，用提取液E即0．01MTris-HCl、0．01MnaCl、3mMMgCl2、0．5mMPMS、PH7．4溶液中悬浮沉淀，测定蛋白含量后，分装-20℃保存备用；制备的单抗重链为IgM，轻链为K链，该单抗能与人食管癌上皮细胞和其它癌的细胞核仁起反应，而不与正常食管上皮细胞及其他细胞核仁反应。