双链引物聚合酶链反应

摘要：

本发明是一种由含双链引物的ＤＮＡ体外扩增技术。首先根据待扩增的靶ＤＮＡ序列合成一对特异性的单链引物，再分别合成与其互补的两条引物，并对后者的３’－末端进行修饰，使其失去延伸能力，然后让它们分别退火成双链引物。将该双链引物、耐热ＤＮＡ聚合酶、dＮＴＰ底物、模板ＤＮＡ、镁离子、ＰＣＲ缓冲液、超纯水等混匀成反应体系，在热循环仪上进行高温、低温、中温的反复热循环，从而获得上百万拷贝的特异的靶ＤＮＡ片段。本发明中用双链引物取代常规ＰＣＲ中使用的单链引物，不仅能够达到热启动的效果，而且在整个反应过程中都能起到降低非特异扩增的作用。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN99114950.5

申请日期：1999-06-22

公开/公告号：CN1238387

公开/公告日：1999-12-15

主分类号：C12P19/34

申请/专利权人:夏庆杰

发明/设计人:夏庆杰

主申请人地址:610041四川省成都市人民南路3段17号

国别省市代码:四川;51

权利要求：

1、一种将含有双链引物、耐热DNA聚合酶、 dNTP底物、模板DNA、镁离子、 PCR缓冲液、超纯水等的反应体系进行高温、低温、中温反复热循环而达到目的DNA片段大量扩增的DNA体外扩增技术，其中的双链引物为依据靶DNA序列合成的能够延伸的一对正引物（包括一条正向引物和一条反向引物）和3’－末端经过修饰的不能延伸的与该对正引物分别互补的反引物退火而成。该双链引物在PCR反应前的低温条件下保持双键状态，不形成二聚体和非特异性退火；在PCR过程中的高温时解链，释放出正引物，使其在低温时与靶DNA的相应区段退火，引导特异的DNA片段的合成：同时还可与反引物退火迅速降低正引物的浓度，降低反应过程中的非特异扩增。经过多次的热循环，产生大量的靶DNA片段。