用随机或确定的引物来重组多核苷酸序列

摘要：

公开了一种以聚合酶催化引物寡核苷酸延伸为基础的多核苷酸序列体外诱变和重组方法。该方法包括用随机序列或确定序列的引物来引导模板多核苷酸生成低水平点突变的ＤＮＡ短片段。将ＤＮＡ片段变性，然后进行退火用酶催化ＤＮＡ聚合。重复该步骤足够次数，以生成包含原始模板多核苷酸突变体的全长基因。这些基因可用聚合酶链反应来进一步扩增并克隆入载体中以表达所编码的蛋白质。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98800350.3

申请日期：1998-03-25

公开/公告号：CN1230990

公开/公告日：1999-10-06

主分类号：C12N15/09

申请/专利权人:加利福尼亚技术学院

发明/设计人:F·H·阿诺德; Z·邵; J·A·阿福霍尔特; H·赵; L·J·吉夫尔

主申请人地址:美国加利福尼亚州

专利代理机构:上海专利商标事务所

代理人:陈文青

国别省市代码:美国;US

权利要求：

1．一种从至少一个模板多核苷酸制备诱变的双链多核苷酸的方法，其中所述诱变的多核苷酸中至少含有一个核苷酸与所述模板多核苷酸相同位置处的核苷酸不同，所述方法包括：a）在所述模板多核苷酸存在下用随机序列或确定序列引物来进行酶催化的DNA聚合合成，以生成包含多核苷酸短片段和所述模板多核苷酸的DNA库；b）将所述DNA库变性成单链片段库；c）在退火条件下使所述单链片段退火，以生成退火片段库；d）使所述退火片段库与聚合酶在使得所述双链片段延伸的条件下培育，以生成含有延伸的单链片段的片段库；e）重复步骤b）至d），直至所述片段库含有所述诱变的多核苷酸。