测定端粒酶活性的端粒重复扩增－微孔板杂交法

摘要：

本发明公开了一种测定端粒酶活性的端粒重复扩增—微孔板杂交法，依次包括样本处理、扩增、包被、变性、杂交与呈色等步骤，本发明用于端粒酶活性测定具有简便快速、成本低廉、重复性好、敏感度高等优点，尤其适用于判断良、恶性胸腹水。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98111646.9

申请日期：1998-12-29

公开/公告号：CN1230598

公开/公告日：1999-10-06

主分类号：C12Q1/00

申请/专利权人:南京医学院附属医院

发明/设计人:王惠民; 瞿晓慈; 张冬雷; 施健; 刘俊华; 杨振华

主申请人地址:226001江苏省南通市西寺路20号

专利代理机构:南通市专利事务所

代理人:葛雷

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

一种测定端粒酶活性的端粒重复扩增一微孔板杂交法，其特征在于：依次包括下列步骤：①样本处理、溶解细胞：将组织切片磨匀，并悬浮于冷裂解液中冷冻裂解，离心分离，取上清；②逆转录、扩增：用CX引物逆转录，用含Ts引物的PCR反应液对上述上清液进行扩增处理，CX引物为5’CCCT TACCCTTACCCTTACCCTTA， Ts引物序列为5’Biotin AATCCGTCGAGCAGCGTT；③固相与杂交：a）包被：将Streptavidin固定于微孔板上；b）变性：将扩增产物用NaOH变性处理；c）杂交与呈色：将经变性处理的变性混合液在微孔板上与含CF探针的杂交液混合，进行杂交反应，然后加酶标杭体，并用呈色液呈色，用酶标仪比色，CF探针为针CF5’ FITC一CCCTAACCCTAACCCTAACCCTAAA。