重组人源锰超氧化物歧化酶制备工艺
一种重组人源锰超氧化物歧化酶的制备工艺，本发明属于生物工程技术领域，其特点是先进行工程菌扩增，收集菌体，然后将菌体裂解，加热处理后离心取可溶部分，经离子交换柱层析纯化。本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ半衰期长、质量稳定、单位成本低等特点，产品不仅可用于化妆品、保健品等民用领域，更适用于医疗领域。
发明专利
CN98111471.7
1998-08-25
CN1210146
1999-03-10
C12N9/08
徐∴% 徐愤% 费如珍
徐∴; 徐愤; 费如珍
210029江苏省南京市峨嵋岭19号11栋301室
江苏;32
1．一种重组人源锰超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是：（1）挑取工程菌的单菌落接种在装有含LB培养基的摇瓶中，32℃振荡培养到OD600＝0．5～0．8，转入装有含锰盐培养基的摇瓶中，32℃培养约10小时，再经42℃诱导培养2～4小时收集菌体：（2）取菌体，用PH8．0，50mMTrisHCL-lmMEDTA-100mMNaCl（TES缓冲液）洗两遍，沉淀悬于0．2倍原体积50mM磷酸钾缓冲液（PH7．8）中，4℃超声破菌、60℃加热30～60分钟，离心取上清，4℃超滤浓缩至原体积的1％～5％，加30～50倍浓缩液体积2mM磷酸钾缓冲液（pH7．8）继续超滤浓缩至原体积的1％～3％；（3）DEm-52柱层析：将超滤平衡过的溶液加在经2mM磷酸钾缓冲液（pH7．8）平衡好的DE-52柱上，先用2mM磷酸钾缓冲液（PH7．8）洗下杂蛋白，再用20mM磷酸钾缓冲液（PH7．8）洗脱；（4）CM-52柱层析：收集含hMmSOD部分，先用40mM醋酸钾缓冲液（pH5．5）超滤，上柱，再用醋酸钾梯度洗脱，超滤浓缩，脱盐，冷冻干燥。