新构建的L－天门冬酰胺酶工程菌及其发酵培养

摘要：

本发明是关于新构建的产Ｌ－天门冬酰胺酶重组菌及其发酵培养的方法。其中包括：从产Ｌ－天门冬酰胺酶的菌株中分离染色体ＤＮＡ，引物的设计，用ＰＣＲ方法钓取酶的基因，酶基因的序列测定，重组质粒的构建，在几种宿主菌的表达，工程菌的发酵培养。本方法中，所得到的酶基因区别于已报道的该酶基因序列，并在个别氨基酸组成上也有差异；工程菌所采用的培养基便宜易得，发酵方法简单可行，每毫升发酵液可达１２０—２２８单位。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN98102046.1

申请日期：1998-06-01

公开/公告号：CN1237633

公开/公告日：1999-12-08

主分类号：C12N9/82

申请/专利权人:中国科学院微生物研究所

发明/设计人:钱世钧; 王颖达; 孟广震; 叶军

主申请人地址:100080北京市海淀区中关村北一条13号

专利代理机构:中科专利商标代理有限责任公司

代理人:严舫

国别省市代码:北京;11

权利要求：

一种产L－天门冬酰胺酶的工程菌，其特征在于：1）该工程菌是由重组质粒pASN在三种宿主茵TG1、JM105、IM602分别转化而得，2）该工程菌在合适的培养基、合适的培养条件下，具有强的产L－天门冬酰胺酶的能力，其酶活力为120－228国际单位／毫升发酵液，3）该工程菌产生的酶不同于己有的大肠杆菌K－12，酶的分子量为144000，由四个相同亚基组成，亚基基因全长为1044bp，其中有33个碱基不同于大肠杆菌K－12，所编码的氨基酸中二个有差别（Ala27和Asn263）。