突变的2,5二酮基-D-葡萄糖酸还原酶及其基因工程表达

摘要：

本发明为一种生物合成２，５二酮基－Ｄ－葡萄糖酸（２，５ＤＫＧ）还原酶的技术，通过聚合酶链反应技术扩增，克隆到有突变的棒状杆菌２，５ＤＫＧ还原酶Ｉ基因，构建适当的表达载体在大肠杆菌和欧文氏菌高效表达来实现发明目的。由２，５ＤＫＧ还原酶Ｉ突变基因所表达的２，５ＤＫＧ还原酶具有很高的催化活性，适用于改进葡萄糖串联发酵产生维生素Ｃ前体２－酮基－Ｌ－古龙酸（２－ＫＬＧ）的工艺。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN97125210.6

申请日期：1997-12-30

公开/公告号：CN1221792

公开/公告日：1999-07-07

主分类号：C12N9/02

申请/专利权人:中国科学院上海生物工程研究中心

发明/设计人:尹光琳; 陈策实

主申请人地址:200233上海市漕宝路500号

专利代理机构:上海华东专利事务所

代理人:费开逵

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1．一种突变的2，5二酮基-D-葡萄糖酸还原酶（2，5 DKG还原酶I）及其基因工程表达系统，其特征是：A．在2，5DKG还原酶1基因编码区中，434位虫A突变为G,734位由T突变为C，从而使相应的2， 5 DKG还原酶I的145位由His突变为Arg，245位由Val突变为Ala。B．2，5DKG还原酶I基因是采用聚合酶链反应技术（PCR）从棒状杆菌SCB3058基因组扩增获得，进而构建重组表达载体转化宿主细胞，构建成基因工程表达系统。