通过高细胞密度发酵在大肠杆菌中制备重组蛋白质的方法

摘要：

本发明涉及用大肠杆菌的宿主－载体系统有效地生成重组蛋白质，特别是重组抗体分子，最好是抗体片段如小抗体的补料分批发酵方法。在给定的条件下，大肠杆菌细胞能够以最大比生长速度生长至非常高的细胞密度。当重组产物生成开始时，只有所生成的产物以限制方式作用于生长。不发生因底物或代谢副产物造成的生长限制。因此，能在特定空间和时间内大量产生重组蛋白质。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN96198949.1

申请日期：1996-11-28

公开/公告号：CN1219203

公开/公告日：1999-06-09

主分类号：C12P21/02

申请/专利权人:默克专利股份有限公司

发明/设计人:W·斯特里特马特; S·马特兹库; D·里森伯格; U·霍恩; U·克努非尔; M·库加;R·温德斯; A·普鲁克图恩; A·克里博

主申请人地址:联邦德国达姆施塔特

专利代理机构:中国国际贸易促进委员会专利商标事务所

代理人:陈文平

国别省市代码:德国;DE

权利要求：

1．借助有分批发酵和分批补料阶段的高细胞密度发酵，在已用携带外来基因和可诱导启动子的质粒转化的大肠杆菌细胞中制备外源蛋白质的方法，其中没有底物或代谢副产物对生长的限制，并从培养基中分离和纯化所表达的蛋白质，使用连续的、自动或半自动分析法及加料系统控制分批补料期的底物浓度，其特征在于在分批补料期中，（i）培养基中碳源的浓度保持恒定在0．1g／L至25g／L范围内，同时维持细胞不受限制