新型DNA聚合酶

摘要：

本发明涉及具有如下性质的ＤＮＡ聚合酶：（１）在以单链模板与引物退火形成的复合物为底物时测定的聚合酶活性，比以活化的ＤＮＡ作模板时显示的聚合酶活性高。（２）具有３’→５’外切核酸酶活性。（３）在使用λＤＮＡ作为模板进行ＰＣＲ反应时，能够扩增约２０千碱基对的ＤＮＡ片段而不需要加入任何其他的酶；构成该ＤＮＡ聚合酶的蛋白质；含有编码该酶的碱基序列的ＤＮＡ；以及制备该ＤＮＡ聚合酶的方法。本发明所提供的是一种同时含有高引物延伸活性和３’→５’外切核酸酶活性的新型ＤＮＡ聚合酶。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN96180125.5

申请日期：1996-12-26

公开/公告号：CN1209170

公开/公告日：1999-02-24

主分类号：C12N15/54

申请/专利权人:宝酒造株式会社

发明/设计人:上森隆司; 石野良纯; 加藤郁之进

主申请人地址:日本京都府京都市

专利代理机构:中国专利代理(香港)有限公司

代理人:卢新华% 齐曾度

国别省市代码:日本;JP

权利要求：

1．特征为具有下列性质的DNA聚合酶：①在以单链模板DNA与引物退火形成的复合物为底物时，测定的聚合酶活性比以活化的DNA为底物时显示的活性高；②具有3’→5’外切核酸酶活性；③在按下述条件以λ-DNA为模板进行聚合酶链反应（PCR）时，能够扩增约20千碱基对的DNA片段；PCR的条件：（a）反应液组成：含10mMTris-盐酸（pH9．2）、3．5mMMgCl2、75mMKCl、400μmdATP、dCTP、dGTP、dTTP、0．01％小牛血清白蛋白、0．1％TritonX-100、5．0ng／50μlλ-DNA、10pmol／50μl引物λ1（序列表的序列号8）、以及引物λ11（序列表的序列号9）、3．7单位／50μlDNA聚合酶；（b）反应条件：以每循环98℃、10秒～68℃、10分钟进行30个循环的PCR反应。