一种人白细胞介素-2的基因合成、表达质粒的构建及产物的生产工艺
白细胞介素－２是作为一种免疫药物可用于治疗某些病毒和治疗癌症，有很好的应用前景，临床需要量很大，是国际上竞相开发的产品。本发明是通过构建带有天然白细胞介素－２基因的表达质粒，在大肠杆菌中高效表达，表达量达菌体总蛋白的３０—４０％。本发明还建立了一种高效的包涵体分离技术和获得高比活的白细胞介素－２纯化方法，这为大量生产白细胞介素－２创造了优越的条件。
发明专利
CN93112388.7
1993-03-31
CN1093109
1994-10-05
C12N15/26
中国科学院上海生物化学研究所
刘新垣
200031上海市岳阳路320号
中国科学院上海专利事务所
汪克臻
上海;31
一种人白细胞介素－ 2 （IL－2）基因的合成，表达质粒的构建及产物的生产工艺，其特征是：a.使用人工设计、化学合成的基因，基因结构式如下：GA ATT CTT ATG GCT CCG ACT TCT TCT TCT ACT AAA AAG ACT CACMet Ala pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Th r GlnCTT CAG CTG GAA CAT CTG CTG CTG GAC CTC CAG ATG ATC CTG AACLeu Gln Leu Glu Hi s Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met lle Leu AsnGGT ATC AAC AAC TAC AAA AAC CCG AAA CTG ACC CGT ATG CTG ACCGly I le Asn Asn Tyr Lys Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu ThrTTC AAA TTC TAC ATG CCG AAA AAA GCT ACC GAA CTG AAA CAT CTGPh e Lys Phe Tyr Met Pro Lys Lys Ala Thr Glu Leu Lys H i s LeuCAG TGC CTT GAA GAA GAA CTG AAA CCG CTG GAA GAA GTT CTG AACGln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys Pro Leu Glu Glu Val Leu AsnCTG GCT CAG TCT AAA AAC TTC CAT CTG CGT CCG CGT GAC CTG ATCLeu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu Are Pro Are Asp Leu lleTCT AAC ATC AAC GTT ATC GTT CTG GAA CTG AAA GGT TCT GAA ACCSer Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu Lys Gly Ser Glu ThrACC TTC ATG TGC GAA TAC GCT GAC GAA ACC GCT ACC ATC GTT GAGThr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala Thr lle Val GluTTC CTG AAC CGT TGG ATC ACC TTC TGC CAG TCT ATC ATC TCT ACCPhe Leu Asn Arg Trp lle Thr Phe Cys Gln Ser Ile ll e Ser ThrCTG ACC TGA TAG GAT CCLeu Thr TermTermIL－2由133个氨基酸组成，合成的该基因有399bp，加上起始密码子ATG，终止密码子TAG和TGA及5’和3’未端克隆用的限制性内切酶切点，共有426 bp，选川了大肠杆菌使用频率高的密码子，使合成的IL－2基因能在大肠杆菌中高效表达，产生大量的人IL－2，而不改变IL－2的氨基酸顺序；（b）将合成的IL－2基因克隆入带有PL启动子CI t857温控阻遏蛋的基因、核糖体t1t25S rRNA终止信号和MCS区的基因载体PLy4后，构建成IL-2的表达质粒PLy4－Syn IL－2，转化大肠杆菌后获得高效表达；（c)表达产物以包涵体的形式存在，得包涵体产物后用8M盐酸胍溶解，上Sephacry1 S－200柱，一步柱层析可以得到纯度）95％，比活＞2x 106国际单位／毫克的IL－2。