还原型非糖基化重组人体间白细胞素—2的制备方法

摘要：

本发明涉及制备还原型非糖基化重组人体ＩＬ₂的方法，该方法包括提取转化微生物体内以颗粒形式存在的ＩＬ₂，然后用反相ＨＰＬＣ纯化。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN89106242.4

申请日期：1989-07-28

公开/公告号：CN1042377

公开/公告日：1990-05-23

主分类号：C12N15/09

申请/专利权人:鲁索-艾克勒夫公司

发明/设计人:丹尼·埃尔; 菲利普·里贝隆; 皮埃尔·伊夫斯·阿比卡西斯

主申请人地址:法国巴黎

专利代理机构:中国专利代理有限公司

代理人:孟八一% 杨九昌

国别省市代码:法国;FR

权利要求：

制备非糖基化重组人体ＩＬ↓〔２〕（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎｅ２）及其顺序的同位基因或衍生物的方法，所述人体ＩＬ〔２〕，一方面具有下述氨基酸排列顺序，即　　Ｘ－Ａｌａ，Ｐｒｏ，Ｔｈｒ，Ｓｅｒ，Ｓｅｒ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ　　Ｌｅｕ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｍｅｔ，Ｉｌｅ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ａｓｎ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａｓｎ，Ｐｒｏ，ＬｙｓＬｅｕ，Ｔｈｒ，Ａｒｇ，Ｍｅｔ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｌｙｓ，Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，Ｍｅｔ，Ｐｒｏ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，　　Ｌｙｓ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｎ，Ｃｙｓ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｇｌｕ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｐｒｏ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｇｌｕ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ　　Ｌｅｕ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｌｙｓ，Ａｓｎ，Ｐｈｅ，Ｈｉｓ，Ｌｅｕ，Ａｒｇ，Ｐｒｏ，Ａｓｐ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ａｓｎ，ＩｌｅＡｓｎ，Ｖａｌ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｓｅｒ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｍｅｔ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｔｙｒ　　Ａｌａ，Ａｓｐ，Ｇｌｕ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｉｌｅ，Ｖａｌ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ａｒｇ，Ｔｒｐ，Ｉｌｅ，Ｔｈｒ，Ｐｈｅ，Ｃｙｓ　　Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｉｌｅ，Ｉｌｅ，Ｓｅｒ，Ｔｈｒ，Ｌｅｕ，Ｔｈｒ　　其中Ｘ代表蛋氨酸或氢原子，位于５８，１０５和１２５位的三个半胱氨酸均为还原型；另一方面具有与同一氨基酸顺序的氧化型ＩＬ↓〔２〕相同的生物活性，氧化型ＩＬ↓〔２〕在５８－１０５位有一双硫键桥；该制备方法包括，先用离液序列高的试剂将转化微生物体内以颗粒状累积的ＩＬ↓〔２〕溶于还原介质中，进行提取，然后通过沉淀纯化，继之用反相高效液相色谱仪纯化，用酸性洗脱液洗脱；该制备方法的特征在于　　ａ）必要时，将从上述色谱仪中洗脱的主要馏分冷却至－２０℃再分离出水相，　　ｂ）用酸性介质稀释所得水相，然后于另一反相高效液相色谱柱上层析，酸性介质洗脱，分离得到上述的ＩＬ↓〔２〕。