一种提高绿豆叶肉原生质体分裂频率以培养再生器官的方法

摘要：

在对绿豆叶肉原生质体培养中，用附加浓度分别为０．５毫克／升的生长素ＮＡＡ，２，４－Ｄ与细胞分裂素ＢＡＰ，ＺＴＡ的Ｄ₂Ａ培养基（铁盐和微量元素用量按ＭＳ培养基），能使绿豆叶肉原生质体的分裂频率达７．８６％。赤霉素ＧＡ₃对原生质体分裂具有明显的抑制作用。采用同一浓度的２，４－Ｄ与ＢＡＰ及ＺＥＡ分别混合配比远较以相同浓度的ＮＡＡ与ＢＡＰ及ＺＥＡ分别相配比的效应为好。所得愈伤组织经４个多月的培养产生了根。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN88105525.5

申请日期：1988-05-22

公开/公告号：CN1038125

公开/公告日：1989-12-20

主分类号：C12N15/00

申请/专利权人:复旦大学

发明/设计人:王韫珠; 葛扣林

主申请人地址:上海市邯郸路220号

专利代理机构:复旦大学专利事务所

代理人:华以正

国别省市代码:上海;31

权利要求：

一种从绿豆叶肉原生质体培养再生器官的方法，本发明的特征由下列各项构成：　　ａ．采用ＨｇＣｌ↓［２］的消毒得到无菌的绿豆种子；　　ｂ．使消毒的无菌绿豆种子在２５－２６℃光照条件下，在基本培养基上生长９－２１天；　　ｃ．切取幼嫩叶子；　　ｄ．切割小块的绿豆幼嫩叶片浸入含有混合酶液的ＣＰＷ１３Ｍ溶液中，其中酶液成份为０．１％（ｗ／ｖ）纤维素酶，０．４％（ｗ／ｖ）果胶酶；　　ｅ．按ｄ所制备的混合物试验材料，置于２５－２７℃摇床上处理１７小时；　　ｆ．经酶介１７小时后用滤网过滤以便去除细胞及碎片，然后离心沉淀原生质体；　　ｇ．用ＣＰＷ１３Ｍ溶液漂洗收集原生质体；　　ｈ．在含有糖及植物激素２，４－Ｄ，ＮＡＡ，ＢＡＰ，Ｚｅａｔｉｐ的原生质体培养基上进行原生质体悬浮培养；　　ｉ．对绿豆原生质体在２７℃及光照条件下进行浅层液体悬浮培养，约２５天左右形成１～２毫米大小的愈伤组织；　　ｊ．直径在１～２毫米的愈伤组织转接到固体培养基上进行扩增。　　ｋ．愈伤组织转接到分化培养基，经多次继代，至出现类似胚状体结构；　　ｌ．在含有植物激素的分化培养基上继代培养，一部分处理分化产生不定根。