OsBAG基因突变体及其在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用

摘要：

本发明属于农业科学技术领域，提供了一种OsBAG基因突变体及其在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用；确定OsBAG基因的突变位点后，再利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对突变位点序列进行克隆，构建重组载体，最终获得了OsBAG基因突变体植株，并将该基因突变体应用在抗褐飞虱水稻选育中。结果表明，OsBAG基因突变体的水稻能够显著提高对褐飞虱的抗性。此外，本发明还提供一种抗褐飞虱水稻的选育方法，在选育中，通过检测植株中是否存在突变位点序列突变，快速鉴定出高抗褐飞虱的植株，及时淘汰低抗性植株，可以大大提高选种效率，节约成本。对于一些需要提高抗虫性的其它植物，可以通过突变该基因的同源基因的方式培育新品种，加大植物育种的应用范围。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202410810936.4

申请日期：2024-06-20

公开/公告号：CN118389539A

公开/公告日：2024-07-25

主分类号：C12N15/29(2006.01)

申请/专利权人:江苏省农业科学院

发明/设计人:付健美;施雨;纪锐;方继朝;赵志畅

主申请人地址:210000 江苏省南京市玄武区孝陵卫钟灵街50号

专利代理机构:南京经纶知识产权代理有限公司

代理人:张丽

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1.一种水稻抗褐飞虱的OsBAG基因突变体，其特征在于：OsBAG基因的突变位点基因序列如SEQ ID NO. 4所示。 2.根据权利要求1所述的水稻抗褐飞虱的OsBAG基因突变体，其特征在于：OsBAG的基因序列如SEQ ID NO.1所示。 3.根据权利要求1所述的水稻抗褐飞虱的OsBAG基因突变体，其特征在于：所述OsBAG基因编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。 4.根据权利要求1所述的水稻抗褐飞虱的OsBAG基因突变体，其特征在于：所述OsBAG基因的mRNA序列如SEQ ID NO.2所示。 5.根据权利要求1-4任一项所述的水稻抗褐飞虱的OsBAG基因突变体在提高水稻对褐飞虱抗性中的应用。 6.利用权利要求1-4任一项所述的水稻抗褐飞虱的OsBAG基因突变体在选育抗褐飞虱水稻中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：鉴定植株中是否包含所述OsBAG基因的突变位点基因序列。 8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：鉴定植株中是否包含所述OsBAG基因的突变位点基因序列的特异性引物的碱基序列如SEQ ID NO. 11或SEQ ID NO. 12所示。 9.一种含有权利要求1-4任一项所述的OsBAG基因突变体的重组载体或转基因细胞。 10.一种抗褐飞虱水稻的选育方法，其特征在于包括以下步骤： 确定OsBAG基因的突变位点，所述突变位点的基因序列如SEQ ID NO. 4所示； 采用Overlapping PCR的方法将突变位点基因序列导入sgRNA表达盒中，构建sgRNA完整表达盒； 通过酶切连接法将sgRNA完整表达盒连接到带有Cas9基因的植物双元表达载体pEGCas9Pubi-H中，形成基因表达载体pEGCas9Pubi-H- OsBAG； 将基因表达载体pEGCas9Pubi-H-OsBAG转化DH5α大肠杆菌感受态，测序筛选后，电转农杆菌EHA105，然后侵染水稻愈伤组织、分化生根，将水稻苗移栽到盆钵中培养，获得T0代植株； 选择阳性纯合突变体进行多代培养，获得传代突变体植株。