pla-7基因在调控粗糙脉孢霉菌丝形态和分泌蛋白能力中的应用

摘要：

本发明公开了，pla‑7基因在调控粗糙脉孢霉菌丝形态的应用，属于基因工程技术领域，pla‑7基因的缺失在粗糙脉孢霉菌中提供促进胞外蛋白产量提高和调控菌丝生长形态的功能，pla‑7基因核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示，pla‑7基因编码的蛋白如SEQ ID NO：5所示，本发明通过敲除pla‑7基因构建一株重组粗糙脉孢霉菌株解决了粗糙脉孢霉的菌丝太长，纤维素酶表达的诱导底物为不溶性纤维素，导致其难以投入到工业生产应用的问题。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202410604961.7

申请日期：2024-05-14

公开/公告号：CN118345108A

公开/公告日：2024-07-15

主分类号：C12N15/80(2006.01)

申请/专利权人:福建师范大学

发明/设计人:秦丽娜;陈伊钒;吴家明;陈慧珍;郑玉强;张瑶;江贤章;黄建忠

主申请人地址:350117 福建省福州市闽侯县上街镇乌龙江中大道18号福建师范大学旗山校区

专利代理机构:福州科扬专利事务所(普通合伙)

代理人:郭梦羽

国别省市代码:福建;35

权利要求：

1.pla-7基因在调控粗糙脉孢霉菌丝形态的应用，其特征在于，所述pla-7基因核苷酸序列如SEQ ID NO4所示。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：pla-7基因编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO5所示。 3.一种重组粗糙脉孢霉菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： S1、敲除粗糙脉孢霉菌株中的pla-7基因得到Δpla-7突变株； S2、Δpla-7突变株与mc-clr-2突变株杂交得到重组粗糙脉孢霉菌株。 4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中Δpla-7突变株的构建方法为： S1-1、扩增pla-7基因表达盒：利用特异性引物分别扩增pla-7基因的上下游同源臂和潮霉素抗性基因及载体骨架片段，将四个片段组装形成包含pla-7基因表达盒的重组载体ppla-7； S1-2、构建ppla-7敲除载体：利用Gibson Assembly技术将步骤S1-1中的四个片段进行连接后得到产物，将产物转化进入大肠杆菌，通过测序再次确认载体构建正确，得到敲除载体ppla-7； S1-3、ppla-7敲除组件的转化：采用电转化法将敲除载体ppla-7导入预处理的粗糙脉孢霉孢子中，通过电击实现DNA导入，转化后的孢子接种到Vogel’s+FIGS+潮霉素固体培养基培养得到转化子； S1-4、转化子的筛选及鉴定：待转化子在固体培养基上长成后，转移至斜面培养基促进孢子形成，提取DNA，利用特异性引物进行PCR扩增鉴定。 5.一种利用权利要求3所述构建方法构建得到的重组粗糙脉孢霉菌株。 6.根据权利要求5所述的重组粗糙脉孢霉菌株在调控粗糙脉孢霉菌丝形态和粗糙脉孢霉分泌胞外蛋白能力中的应用。 7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，胞外蛋白为粗糙脉孢霉的内源蛋白纤维素酶。