CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用
CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，CYP720B1基因的核苷酸序列如SEQ ID No 1所示，其编码区的核苷酸序列如SEQ ID No 2所示；CYP720B1基因编码的CYP720B1蛋白质氨基酸序列如SEQ ID No 3所示。本发明突变CYP720B1基因后所获得的莱茵衣藻细胞株，经铜离子生长曲线及吸附效率的测定，发现突变型藻株的生长速率更快、吸附效率更高，且具有较高的铜离子耐受性。本发明为后续深入研究CYP720B1基因如何影响衣藻内部各种氧化应激反应及金属转运、代谢相关蛋白的表达与活性及相关胁迫细胞器功能提供了便利，后期将为莱茵衣藻重金属铜代谢机制的理论研究及重金属生物修复的应用研究奠定坚实的基础。
发明专利
CN202410555248.8
2024-05-06
CN118406700A
2024-07-29
C12N15/31(2006.01)
江苏师范大学
王亮;李亚;蒋林;徐闯;王苏慧;钱蕴瑶;吴怡琼;董周舟;师媛媛
221116 江苏省徐州市铜山新区上海路101号
北京淮海知识产权代理事务所(普通合伙)
李妮
江苏;32
1.CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，所述CYP720B1基因的核苷酸序列如SEQ ID No 1所示，所述CYP720B1基因的插入突变能够提高莱茵衣藻对铜离子胁迫的耐受性。 2.根据权利要求1所述的CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，其特征在于，所述CYP720B1基因的编码区能编码CYP720B1蛋白质，该编码区的核苷酸序列如SEQ ID No 2所示；所述CYP720B1蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID No 3所示。 3.根据权利要求1所述的CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，其特征在于，包括以下步骤： (1)构建野生型莱茵衣藻突变体文库，将抗性基因片段aphVIII随机整合入衣藻基因组，造成随机插入突变； (2)通过铜离子耐受/吸附的藻株细胞筛选方法，筛选目标藻株，提取突变体细胞的基因组； (3)利用RESDA-PCR技术扩增突变位点序列，测序及莱茵衣藻基因组数据库比对，发现aphVIII片段插入CYP720B1基因3’UTR区域。 4.根据权利要求3所述的CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述抗性基因片段aphVIII为莱茵衣藻常规抗性筛选基因片段，具有巴龙霉素抗性。 5.根据权利要求3所述的CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述铜离子耐受/吸附的藻株细胞筛选方法为在400μM Cu2+的TAP平板上将随机突变转化子涂布其中，筛选候选突变型藻株。 6.根据权利要求3所述的CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述RESDA-PCR技术所用的扩增引物为，第一轮PCR反应所用引物为特异引物outer-R和四个简并性引物DegAlu I、DegTaq I、DegSac II、DegPst I；第二轮PCR反应所用引物为特异引物inner-R和简并引物上特异结合位点引物Q0；引物outer-R、引物DegAlu I、引物DegTaq I、引物DegSac II、引物DegPst I、引物inner-R、引物Q0的核苷酸序列分别如SEQ ID No 4、SEQ ID No 5、SEQ ID No 6、SEQ ID No 7、SEQ ID No8、SEQ ID No9、SEQ ID No 10所示。 7.根据权利要求3所述的CYP720B1基因在莱茵衣藻对铜离子胁迫耐受性中的应用，其特征在于，步骤(3)中，所述RESDA-PCR技术所设置的第一轮PCR反应程序为： 所述RESDA-PCR技术所设置的第二轮PCR反应程序为：