AsCas12f编辑系统在植物中进行基因编辑的应用

摘要：

本发明涉及生物技术和基因工程技术领域，具体涉及AsCas12f编辑系统在植物中进行基因编辑的应用；所述的AsCas12f编辑系统含有AsCas12f变体和gRNA，所述的sCas12f变体为enAsCas12f‑YHAM或enAsCas12f‑HKRA。含有AsCas12f变体的编辑系统可以对水稻或其他植物基因组进行编辑，以实现靶向序列的碱基插入或删除，从而实现植物该基因的表达被额改变或修饰。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202410530145.6

申请日期：2024-04-28

公开/公告号：CN118440976A

公开/公告日：2024-08-05

主分类号：C12N15/82(2006.01)

申请/专利权人:南京农业大学三亚研究院%南京农业大学

发明/设计人:谭俊杰;李铮;叶争妍

主申请人地址:572025 海南省三亚市崖州区崖州湾科技城振州路梧桐院9栋;

专利代理机构:南京天华专利代理有限责任公司

代理人:吴爽%徐冬涛

国别省市代码:海南;46

权利要求：

1.AsCas12f编辑系统在植物编辑中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的AsCas12f编辑系统含有AsCas12f变体和gRNA，所述的AsCas12f变体为enAsCas12f-YHAM或enAsCas12f-HKRA。 3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述enAsCas12f-YHAM的氨基酸序列如SEQID NO.3所示，编码enAsCas12f-YHAM的核酸分子如SEQ ID NO.4所示。 4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述enAsCas12f-HKRA的氨基酸序列如SEQID NO.5所示；编码enAsCas12f-HKRA的核酸分子序列如SEQ ID NO.6所示。 5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，含有AsCas12f变体的编辑器原件包括启动子Ubi，AsCas12f变体，2个核定位信号NLS和终止子； 优选的，所述2个核定位信号NLS分别融合于AsCas12f变体的N端和C端。 6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述gRNA由OsU3启动子、scaffold、gRNA靶向序列、3’ HDV核酶和终止信号依次构成； 优选的，所述gRNA为sgRNA或sgRNA_ΔS3–5_v7； 优选的，所述OsU3启动子如SEQ ID NO.7所示； 优选的，所述scaffold序列为SEQ ID NO.8或者SEQ ID NO.9所示； 优选的，所述gRNA靶向序列序列如SEQ ID NO.10-12任一种所示； 优选的，所述3’ HDV核酶和终止信号序列如SEQ ID NO.13所示。 7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述编辑系统由enAsCas12f-YHAM与sgRNA_ΔS3–5_v7、或enAsCas12f-HKR与sgRNA_ΔS3–5_v7A构成。 8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物为水稻。 9.一种利用权利要求2-8任一所述的AsCas12f编辑系统在水稻中进行基因编辑的方法，其特征在于，所述方法包括利用AsCas12f变体与gRNA在水稻中进行基因编辑，在靶基因产生碱基的插入或删除，从而实现对水稻基因组的基因编辑，获得转基因植物或者植物部分。 10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述基因编辑的方法包括向水稻植物细胞、水稻种子、水稻植物、水稻植物组织或水稻植物部分中递送AsCas12f变体和gRNA的步骤。