RrCYP450蛋白及编码基因和应用
本发明提供RrCYP450蛋白及编码基因和应用，属于合成生物技术领域。本发明以刺梨（Rosa roxburghii Tratt.）为研究对象，综合利用转录组学和非靶向代谢组学联合分析，首次发现催化五环三萜化合物C‑2位、C‑19位羟基化的CYP450酶蛋白：RrCYP450‑3、RrCYP450‑4和RrCYP450‑5，并通过体外酶活实验阐明了RrCYP450‑3、RrCYP450‑4具有在熊果酸C‑2位点进行羟基化的潜力，RrCYP450‑5具有在熊果酸C‑19位点进行羟基化的潜力，通过分子对接实验进一步验证了刺梨中三个RrCYP450对于五环三萜的羟基化修饰功能。
发明专利
CN202410108921.3
2024-01-26
CN117625569A
2024-03-01
C12N9/02(2006.01)
东北林业大学
付玉杰;宁愿;丁运坤;刘志国;辛娣
150040 黑龙江省哈尔滨市香坊区和兴路26号
武汉知产时代知识产权代理有限公司
王佩
黑龙江;23
1. 用于合成刺梨酸的RrCYP450蛋白组合，其特征在于，所述RrCYP450蛋白组合由RrCYP450-3和RrCYP450-5组成，或者由RrCYP450-4和RrCYP450-5组成，所述RrCYP450-3的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述RrCYP450-4的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述RrCYP450-5的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。 2. 用于表达权利要求1中所述RrCYP450蛋白组合的基因组合在合成或生产刺梨酸中的应用，其特征在于，所述基因组合由RrCYP450-3基因和RrCYP450-5基因组成，或者由RrCYP450-4基因和RrCYP450-5基因组成，所述RrCYP450-3基因的碱基序列如SEQ ID NO.4所示，所述RrCYP450-4基因的碱基序列如SEQ ID NO.5所示，所述RrCYP450-5基因的碱基序列如SEQ ID NO.6所示。 3.如权利要求1中所述的RrCYP450-3或者如权利要求2中所述的RrCYP450-3基因在催化五环三萜化合物中C-2位羟基化中的应用。 4.如权利要求1中所述的RrCYP450-4或者如权利要求2中所述的RrCYP450-4基因在催化五环三萜化合物中C-2位羟基化中的应用。 5.如权利要求1中所述的RrCYP450-5或者如权利要求2中所述的RrCYP450-5基因在催化五环三萜化合物中C-19位羟基化中的应用。 6.包含权利要求2中所述的RrCYP450-3基因的重组表达载体、重组表达细胞或重组表达菌株。 7.包含权利要求2中所述的RrCYP450-4基因的重组表达载体、重组表达细胞或重组表达菌株。 8.包含权利要求2中所述的RrCYP450-5基因的重组表达载体、重组表达细胞或重组表达菌株。 9.如权利要求3-5中任一项所述的应用，其特征在于，所述五环三萜化合物包括熊果酸。 10. 如权利要求1中所述的蛋白 RrCYP450-3或RrCYP450-4或RrCYP450-5的制备方法，其特征在于，将线性化的 pET28(a+)-SUMO 质粒分别与 RrCYP450-3或RrCYP450-4或RrCYP450-5 基因连接，构建相应的重组表达载体，分别将重组表达载体导入大肠杆菌宿主细胞中，获得相应的重组表达细胞，培养重组表达细胞，从培养物中获得蛋白RrCYP450-3或RrCYP450-4或RrCYP450-5。