S-取代半胱氨酸的制备方法、AMA衍生物及其制备方法
本发明公开了一种S‑取代半胱氨酸的制备方法、AMA衍生物及其制备方法，S‑取代半胱氨酸的制备方法包括以下步骤：在缓冲液中加入硫醇或硫酚、O‑磷酸‑L‑丝氨酸与AMA合成酶，室温静置反应，经阴离子交换色谱法纯化得到产物。本发明提供的产物具有特定的立体构型，提供的酶促合成方法具有高度立体和位点选择性，补充了现有含硫非蛋白源氨基酸的酶促合成催化工具，可以用于含硫AMA衍生物及其它氨基多羧酸类化合物的酶促模块化合成。
发明专利
CN202410045816.X
2024-01-12
CN117551707A
2024-02-13
C12P13/04(2006.01)
中国药科大学
张洁琳;解晓颖;宋敬武;梁钰宗
210009 江苏省南京市鼓楼区童家巷24号
南京苏高专利商标事务所(普通合伙)
刘红阳
江苏;32
1.一种S-取代半胱氨酸的制备方法，其特征在于，所述S-取代半胱氨酸具有如下化学结构：其中R代表正丙基、烯丙基、羧甲基、羧乙基、羟甲基、羟乙基、苄基、邻氨基苯基、间氨基苯基或对氨基苯基；(R)代表相应位置手性碳的立体构型为R； 所述S-取代半胱氨酸的制备方法，包括以下步骤： （1）向缓冲液中加入硫醇或硫酚化合物、O-磷酸-L-丝氨酸与AMA合成酶，配制得到反应体系： （2）将步骤（1）所得的反应体系调节pH至中性，于20-25 ℃下静置反应；反应完成后，水浴使酶失活，过滤、纯化后得到产物，即为S-取代半胱氨酸。 2.根据权利要求1所述的S-取代半胱氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，硫醇或硫酚化合物、O-磷酸-L-丝氨酸与AMA合成酶的摩尔比为1：5-7：0.0015。 3.根据权利要求1所述的S-取代半胱氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，缓冲液为pH=7.0的KH2PO4-K2HPO4缓冲液。 4. 根据权利要求1所述的S-取代半胱氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，于20-25 ℃下静置反应的反应时间为24-48小时。 5.根据权利要求1所述的S-取代半胱氨酸的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，纯化方法为阴离子交换色谱法。 6.根据权利要求5所述的S-取代半胱氨酸的制备方法，其特征在于，纯化方法具体包括以下步骤： （1）使用氯型阴离子交换树脂，溶胀装柱，利用氢氧化钠溶液转型为羟基型阴离子交换树脂，再用去离子水冲洗至中性； （2）将反应液上样色谱柱，依次用去离子水、醋酸、盐酸进行梯度洗脱，将产物所在洗脱液进行汇总、旋蒸和冻干，获得产物。 7.一种含硫AMA衍生物，其特征在于，所述含硫AMA衍生物具有如下任一化学结构： XX9、XX10。 8.一种含硫AMA衍生物的制备方法，其特征在于，所述含硫AMA衍生物的制备方法为以下任一方法： 方法一： (1)以间氨基苯硫酚与O-磷酸-L-丝氨酸为初始反应物，AMA合成酶为催化剂，在缓冲液中反应一段时间，分离获得中间产物X9； (2)以X9和富马酸为初始反应物，EDDS裂解酶为催化剂，在缓冲液中配制得到反应体系，在室温条件下反应合成产物，即为XX9； 方法二： (1)以对氨基苯硫酚与O-磷酸-L-丝氨酸为初始反应物，AMA合成酶为催化剂，在缓冲液中反应一段时间，分离获得中间产物X10； (2)以X10和富马酸为初始反应物，EDDS裂解酶为催化剂，在缓冲液中配制得到反应体系，在室温条件下反应合成产物，即为XX10。 9.根据权利要求8所述的含硫AMA衍生物的制备方法，其特征在于，方法一中，步骤（1）中，X9、富马酸、EDDS裂解酶的摩尔比为1:5-7：0.0005；和/或，方法二中，步骤（1）中，X10、富马酸、EDDS裂解酶的摩尔比为1:5-7：0.0005。 10. 根据权利要求8所述的含硫AMA衍生物的制备方法，其特征在于，步骤（1）中/或步骤（2），反应温度为20-25 ℃，反应时间为24-48小时。