NK饲养单克隆细胞系及其应用
本发明提供一种NK饲养单克隆细胞系及其应用，NK饲养单克隆细胞系包括转入至少一种下述目的基因的K562细胞：CD137L、OX40L、mbIL‑15、IL‑15RA、mbIL‑21。利用NK饲养单克隆细胞系细胞株能够激活NK细胞的体外扩增培养方法，使得NK细胞的体外扩增效率、细胞纯度显著提升，同时提升NK细胞的CAR转导效率及CAR特异性效应，进而显著提升NK细胞的杀伤能力。
发明专利
CN202410033926.4
2024-01-10
CN117535241A
2024-02-09
C12N5/0783(2010.01)
浙江康佰裕生物科技有限公司
杨鑫;杨华杰;朱建高;金宵;杨文君
310000 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号5幢20层2006-2008室
北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙)
叶帅东
浙江;33
1. NK饲养单克隆细胞系，包括转入至少一种下述目的基因的K562细胞：CD137L、OX40L、mbIL-15、IL-15RA、mbIL-21。 2.根据权利要求1所述的NK饲养单克隆细胞系，其特征在于：所述NK饲养单克隆细胞系包括FC1、FC2、FC3、FC4的至少一种： FC1：基于K562细胞，转入目的基因CD137L&OX40L，核苷酸序列示于SEQ NO:1； FC2：基于FC1，转入目的基因mbIL-15&IL-15RA，核苷酸序列示于SEQ NO:2； FC3：基于FC1，转入目的基因mbIL-21&Myc&PDGFRβ，核苷酸序列示于SEQ NO:3； FC4：基于FC3，转入目的基因mbIL-15&IL-15RA。 3.权利要求1或2所述NK饲养单克隆细胞系在制备抗肿瘤产品中的应用。 4.权利要求1或2所述NK饲养单克隆细胞系在扩增NK细胞中的应用。 5.权利要求1或2所述NK饲养单克隆细胞系在提高扩增NK细胞纯度中的应用。 6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述应用包括将扩增NK细胞的纯度提高至不低于90%。 7.权利要求1或2所述NK饲养单克隆细胞系在提高NK细胞中逆病毒载体CAR的转导效率的应用。 8.权利要求1或2所述NK饲养单克隆细胞系在提高NK细胞CAR特异性效应功能中的应用。 9.一种NK细胞扩增的方法，其特征在于：使用权利要求1或2所述NK饲养单克隆细胞系与NK细胞共培养。 10.一种NK饲养细胞系效能的检测方法，其特征在于：包括收集依据权利要求9所述NK细胞扩增的方法所获得的NK细胞，进行下述1)-5)至少一种的操作： 1)、观察NK细胞的形态、鉴定NK细胞的特征； 2)、计算NK细胞的数量； 3)、计算NK细胞的纯度； 4)、计算NK细胞中逆病毒载体CAR的转导效率； 5)、计算NK细胞中IFNγ的比率。