miRNA标志物组合在制备预测年龄产品中的应用
本发明提供了miRNA标志物组合在制备预测年龄产品中的应用，属于基因工程诊断技术领域。本发明对牙齿样本开发了miRNA提取和荧光定量PCR方法，经上述方法分别得出miR‑22‑3p和miR‑29a‑3p的相对表达量，以kNN模型分析出miR‑22‑3p和miR‑29a‑3p的相对表达量与预测年龄的对应关系，得出样本的预测年龄。本发明应用方法具有高检测灵敏度的特点，仅需要0.05ng的牙齿miRNA即可实现年龄预测，能够对20~70岁人群的牙齿样本进行年龄预测，误差在4.5岁以内。
发明专利
CN202410003758.4
2024-01-03
CN117487937A
2024-02-02
C12Q1/6888(2018.01)
山东第一医科大学(山东省医学科学院)
方晨;王嘉慧;马鲁豫;严江伟;周鹏;李杨;王郡;杨彭逸;燕泽宇;孙萌忆;李敏;孟德萍;许晓群;于春江;王昕宇;熊若彤;赵财成;张佳;魏然;纪璇;王郡甫;孙广莲
250117 山东省济南市槐荫区青岛路6699号
北京高沃律师事务所
翟羽晨
山东;37
1.miRNA标志物组合在制备预测年龄产品中的应用，其特征在于，所述miRNA标志物组合为牙齿中的miR-22-3p和miR-29a-3p。 2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂、芯片、试纸和试剂盒。 3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，利用所述miRNA标志物组合预测年龄的方法，包括如下步骤： （1）提取样品牙齿miRNA，反转录得cDNA； （2）对获得的cDNA进行PCR扩增，计算得Ct值，以U6作为内参，计算得出△Ct 样本； （3）以20~30年龄段样品作为对照组，按照步骤（1）和（2）方法计算出△Ct 对照； （4）根据基因相对表达量=2-（△Ct 样本-△Ct 对照）计算出miRNA的相对表达量； （5）基于miRNA的相对表达量用kNN模型进行数据分析，得出预测年龄。 4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，在提取miRNA时，需要利用磨牙器将牙齿粉碎，取牙髓用于后续试验。 5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，对牙髓的处理步骤包括：于牙髓中加入0.5~1.5mL裂解液和8~12μL蛋白酶k，加热震荡1.5~3.5h。 6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，进行反转录时，miRNA浓度定为480~520µg/L。 7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR反应体系为：总体积20µL，10µL 2×miRcute增强型miRNA预混液、0.4µL正向引物、0.4µL反向引物、1µL cDNA模板溶液、8.2µL双蒸水。 8.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR反应条件为：95℃ 15min，94℃ 20s，64℃ 30s 5循环，72℃ 34s，94℃ 20s 40循环，60℃ 34s。 9.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述kNN模型基于Orange软件和训练集中miR-22-3p和miR-29a-3p基因相对表达量和实际年龄构建得到。