SFV重组病毒载体系统

摘要：

本申请涉及一种重组甲病毒载体，包含所述甲病毒载体的载体系统，以及用于纯化所述甲病毒的浓缩及纯化方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311713881.7

申请日期：2023-12-12

公开/公告号：CN118421702A

公开/公告日：2024-08-01

主分类号：C12N15/86(2006.01)

申请/专利权人:北京干细胞与再生医学研究院

发明/设计人:李伟;周琪;韩稼葆;白涵瑜

主申请人地址:100101 北京市朝阳区大屯路甲3号

专利代理机构:北京彩和律师事务所

代理人:闫桑田%刘磊

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1.重组甲病毒载体，其从5’至3’端至少依次包含5’UTR核酸序列、包装信号核酸序列、外源基因核酸序列及3’UTR核酸序列，其中所述5’UTR核酸序列、包装信号核酸序列及3’UTR核酸序列源自甲病毒，优选所述甲病毒为Semliki森林脑炎病毒(SFV)。 2.根据权利要求1的载体，其中所述5’UTR核酸序列包含SEQ ID NO：1所示的多核苷酸序列，或与SEQ ID NO：1具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列。 3.根据权利要求1的载体，其中所述包装信号核酸序列包含选自SEQ ID NO：2至4及与SEQ ID NO：2至4具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列中的任一个或多个。 4.根据权利要求3的载体，其中所述包装信号核酸序列包含SEQ ID NO：5所示的多核苷酸序列，或与SEQ ID NO：5具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列。 5.根据权利要求1的载体，其中所述3’UTR核酸序列包含SEQ ID NO：6的多核苷酸序列或与SEQ ID NO：6具有80％以上序列同一性的多核苷酸序列。 6.根据权利要求1的载体，其为RNA，其在3’UTR的3’端进一步包含poly A尾。 7.根据权利要求6的载体，其中所述poly A尾为β-球蛋白poly A尾。 8.根据权利要求1的载体，其为DNA，其在3’UTR的3’端进一步包含poly A加尾信号或poly A尾编码序列，且在5’UTR的5’端进一步包含启动子。 9.重组甲病毒载体系统，其包含根据权利要求1-8中任一项所述的载体，以及辅助载体，所述辅助载体包含甲病毒结构蛋白和/或非结构蛋白的编码序列，优选包含一个或多个选自甲病毒下述蛋白的编码序列：非结构蛋白(nsp)1、nsp2、nsp3、nsp4、E1、E2、E3、6K及衣壳蛋白(C)，优选所述甲病毒为Semliki森林脑炎病毒(SFV)。 10.纯化Semliki森林脑炎病毒(SFV)的方法，其至少包含密度梯度离心步骤，其使用的密度梯度至少包含一个密度为1.1至1.2g/ml中任意数值的层A，优选为1.105至1.162g/ml中任意数值的层A。