Taq酶突变体和其编码多核苷酸

摘要：

本发明提供了一种Taq酶突变体和其编码多核苷酸，具体地，本发明应用蛋白质定向进化技术，对针对Taq酶的聚合酶活性结构域构建随机突变库，通过逐步添加筛选压力，使不适合的突变自然淘汰，具有优势性状的突变逐步积累，最终筛选出一系列对Taq酶扩增性能、聚合性能有关键作用的氨基酸位点及其突变，并得到高扩增性能的Taq酶突变体。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311686893.5

申请日期：2019-01-29

公开/公告号：CN117660404A

公开/公告日：2024-03-08

主分类号：C12N9/12(2006.01)

申请/专利权人:广州达安基因股份有限公司

发明/设计人:蒋析文;刘霭珊

主申请人地址:510665 广东省广州市高新技术产业开发区香山路19号

专利代理机构:上海上谷知识产权代理有限公司

代理人:陈详

国别省市代码:广东;44

权利要求：

1.一种突变的DNA聚合酶，其特征在于，所述突变的DNA聚合酶在SEQ ID NO.2所示的野生型DNA聚合酶基础上进行突变，所述突变是：第508位氨基酸残基突变为L、第453位氨基酸残基突变为A和第518位氨基酸残基突变为Q。 2.如权利要求1所述的DNA聚合酶，其特征在于，所述突变的DNA聚合酶的活性是野生型DNA聚合酶的至少1.2倍；优选地至少1.5倍。 3.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子编码权利要求1所述的突变的DNA聚合酶。 4.一种载体，其特征在于，所述载体含有权利要求3所述的多核苷酸分子。 5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求4所述的载体或染色体整合有权利要求3所述的多核苷酸分子。 6.如权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。 7.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述原核细胞为大肠杆菌细胞。 8.如权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述真核细胞为酵母细胞。 9.一种制备权利要求1所述的突变的DNA聚合酶的方法，其特征在于，包括步骤： (i)在适合的条件下，培养权利要求5的宿主细胞，从而表达出所述的突变的DNA聚合酶；和 (ii)分离所述的突变的DNA聚合酶。 10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的突变的DNA聚合酶。