RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法及其应用
本发明公开了RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法及其应用，包括以下步骤：分析RIOK1的表达差异、明确RIOK1增殖和转移的作用和探究RIOK1的作用机制。本发明拟利用分子细胞生物学及生物信息学技术，通过体外细胞模型并结合临床样本的综合研究方法，在良好的前期的工作基础上开展RIOK1促进肝细胞癌增殖转移的分子机制的探索工作，明确了RIOK1的高表达与临床肝细胞癌病人生存期密切相关，特异性敲低RIOK1可显著降低肝细胞癌细胞的增殖能力、侵袭能力和迁移能力，有望在肝癌治疗领域取得重大突破。
发明专利
CN202311634687.X
2023-12-01
CN117625787A
2024-03-01
C12Q1/6886(2018.01)
宁波市第二医院
阮春燕;张顺;商天宇;陈明珏;王鹤儒
315010 浙江省宁波市西北街41号
杭州品众专利代理事务所(特殊普通合伙)
汪洋
浙江;33
1.RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一：分析RIOK1的表达差异； 步骤二：明确RIOK1增殖和转移的作用； 步骤三：探究RIOK1的作用机制，通过查阅分析现有研究成果，初步判断肝癌细胞中RIOK1影响细胞增殖可能的途径。 2.根据权利要求1所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，所述步骤一中，研究表达差异时，分析其与临床病理特征的关系及其辅助诊断、生物标记物的价值，分为在肝癌细胞中的表达水平的研究和在肝癌样本组织中的表达水平的研究。 3.根据权利要求2所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，在肝癌细胞中的表达水平的研究时，需要培养不同肝细胞癌细胞系，检测正常细胞和肝细胞癌中RIOK1的RNA和蛋白表达水平，明确其在肝癌细胞中的表达情况。 4.根据权利要求2所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，在肝癌样本组织中的表达水平的研究时，即从生物样本库选取肝癌组织样本，检测肝癌组织和癌旁正常组织中RIOK1的表达水平，并进行免疫组化染色，明确RIOK1在临床肝细胞癌中的表达以及与肝癌分期之间的关系。 5.根据权利要求1所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，所述步骤二中，明确RIOK1增殖和转移作用时需要首先建立细胞系构建，再利用构建好的肝细胞癌细胞模型，最终再利用裸鼠成瘤实验对模型进行检测。 6.根据权利要求5所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，细胞系构建需要选特定的肝细胞癌HepG2和Huh7细胞系，利用慢病毒感染的方法敲低RIOK1或者过表达RIOK1，构建特异性敲低或者过表达RIOK1肝细胞癌细胞系。 7.根据权利要求5所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，利用构建好的肝细胞癌细胞模型并使用RTCA实验检测敲低或过表达RIOK1对细胞增殖的影响，用划痕实验和Transwell实验检测敲低或过表达RIOK1对迁移和侵袭的影响，用考马斯亮蓝法检测对细胞存活的影响，明确RIOK1在肝细胞癌中的生物学作用。 8.根据权利要求5所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法，其特征在于，利用裸鼠成瘤实验，将敲减RIOK1的肝癌细胞，进行裸鼠皮下成瘤实验，明确RIOK1的敲减是否抑制肿瘤的发生。 9.一种用于促肝细胞癌细胞增殖和转移试剂盒，其特征在于，包括检测RIOK1基因表达水平的引物对和/或RIOK1基因编码蛋白含量检测试剂。 10.根据权利要求1-9任一所述的RIOK1促肝细胞癌细胞增殖和转移的方法在肝癌辅助诊断领域的应用。