MiR-503-322在构建急性和慢性胰腺炎动物模型中的应用
本发明公开了miR‑503‑322在构建急性和慢性胰腺炎动物模型中的应用，属于动物模型构建技术领域。本发明通过基因编辑的方法构建了一种成年诱导型胰腺腺泡细胞特异性过表达miR‑503‑322的基因敲入小鼠模型（KI‑miR‑503‑322Ela+小鼠），该小鼠模型由于腺泡细胞中miR‑503‑322的诱导性高表达，自发引起腺泡细胞胰酶激活，导致腺泡细胞坏死和胰腺炎的急性发作；在急性胰腺炎发作后，该模型小鼠还可抑制腺泡细胞增殖，进而促发了慢性胰腺炎。本发明的模型可用于研究急、慢性胰腺炎的发病机理，并进一步筛选预防和/或治疗胰腺炎的药物。
发明专利
CN202311634471.3
2023-12-01
CN117327739A
2024-01-02
C12N15/87(2006.01)
南京医科大学
朱云霞;韩晓;刘可容;吕婷婷;唐伟;肖潇;李雅婷;常晓嫒
210029 江苏省南京市汉中路140号
江苏圣典律师事务所
肖明芳
江苏;32
1.MiR-503-322基因在构建急性或慢性胰腺炎动物模型中的应用，其中，所述动物模型的腺泡细胞特异性过表达miR-503-322基因，所述miR-503-322基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。 2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述腺泡细胞为胰腺外分泌腺腺泡细胞；所述动物为哺乳动物。 3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述动物为C57BL/6J小鼠。 4.一种miR-503-322基因敲入小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）基于CRISPR-Cas9系统设计靶向小鼠miR-503-322基因的sgRNA，其序列如SEQ IDNO.2所示； （2）合成小鼠CAG-LSL-miR-503-322片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，基于CRISPR-Cas9系统将小鼠CAG-LSL-miR-503-322片段重组到靶位点H11上，构建miR-503-322条件性敲入动物模型，命名为miR-503-322 KI小鼠； （3）将miR-503-322 KI小鼠与Elastase-CreER工具小鼠交配，通过小鼠基因型鉴定筛选得到Elastase-Cre阳性并且miR-503-322 KI杂合的后代，命名为KI-miR-503-322Ela+杂合小鼠，即得到诱导型腺泡细胞特异性miR-503-322基因敲入小鼠。 5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，用于小鼠基因型鉴定的特异性引物对包括KI-1引物对、KI-4引物对、WT-1引物对和WT-2引物对，其中， KI-1引物对为： KI-1-F：5’-TGTCTGGATCCCCATCAAGCTG-3’； KI-1-R：5’-GATCTGCTGGTGAGGCAAAGGGT-3’； KI-4引物对为： KI-4-F：5’-TTCAGCTGCCCACTCTACTG-3’； KI-4-R：5’-GACCTCTGAAAGACCAGCTA-3’； WT-1引物对为： WT-1-F：5’-CCTTAAAGTTGTACGGAAGAGTCGGGT-3’; WT-1-R：5’-CCACCTTTGCCCCAGATACCAAGAC3’; WT-2引物对为： WT-2-F：5’-CTCTATGACCTGCTGCTGGAGGCG-3’； WT-2-R：5’-CCACCTTTGCCCCAGATACCAAGAC-3’。 6.一种急性或慢性胰腺炎动物模型的构建方法，其特征在于，向权利要求4或5构建得到的诱导型腺泡细胞miR-503-322基因敲入小鼠腹腔注射他莫昔芬溶液，获得腺泡细胞特异性过表达miR-503-322的基因敲入小鼠模型。 7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，腹腔注射他莫昔芬溶液的时机为小鼠成年期，注射剂量为100 mg/kg/天，连续注射2天；急性胰腺炎动物模型在首次他莫昔芬溶液注射2天后即可得到，慢性胰腺炎动物模型在首次注射他莫昔芬溶液28天后得到。 8.根据权利要求6或7所述的构建方法，其特征在于，所述他莫昔芬溶液通过将75~100mg他莫昔芬粉末溶解于5mL玉米油中得到。 9.权利要求6~7任一项所述的构建方法得到的急性或慢性胰腺炎动物模型。 10.权利要求9构建得到的急性或慢性胰腺炎动物模型在筛选预防和/或治疗胰腺炎的药物中的应用。