CMV抗性赋予基因
本发明涉及一种修饰的ABCB9基因，其编码赋予葫芦科植物特别是黄瓜植物对CMV的抗性的蛋白质，其中所述蛋白质在所述葫芦科植物特别是黄瓜植物中表达，其特征在于所述基因包含a)编码包含SEQ ID NO：4的蛋白质的核苷酸序列；b)包含SEQ ID NO：3的核苷酸序列；c)编码通过包含SEQ ID NO：4的蛋白质的一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或添加而衍生的蛋白质的核苷酸序列；d)编码包含与SEQ ID NO：4至少85％相同的氨基酸序列的蛋白质的核苷酸序列；e)与SEQ ID NO：3至少85％相同的核苷酸序列；或f)根据c)或d)的核苷酸序列，其中蛋白质在SEQ ID NO：4的位置428或与其对应的位置上包含甲硫氨酸(M)。
发明专利
CN202311517668.9
2021-02-26
CN117551663A
2024-02-13
C12N15/29(2006.01)
瑞克斯旺种苗集团公司
C·范德马斯;A·C·科肯
荷兰德利尔
中国贸促会专利商标事务所有限公司
谢丽菲
荷兰;NL
1.一种修饰的ABCB9基因，其编码赋予葫芦科植物特别是黄瓜植物对CMV的抗性的蛋白质，其中所述蛋白质在所述葫芦科植物特别是黄瓜植物中表达，其特征在于所述基因包含选自以下的核苷酸序列： a)编码包含SEQ ID NO：4的蛋白质的核苷酸序列； b)包含SEQ ID NO：3的核苷酸序列； c)编码通过包含SEQ ID NO：4的蛋白质的一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或添加而衍生的蛋白质的核苷酸序列； d)编码包含与SEQ ID NO：4至少85％相同的氨基酸序列的蛋白质的核苷酸序列； e)与SEQ ID NO：3至少85％相同的核苷酸序列； f)根据c)或d)的核苷酸序列，其中蛋白质在SEQ ID NO：4的位置428或与其对应的位置上包含甲硫氨酸(M)。 2.一种蛋白质，其赋予葫芦科植物特别是黄瓜植物对CMV的抗性，其中所述蛋白质在所述葫芦科植物特别是黄瓜植物中表达并且所述蛋白质由如权利要求1所述的基因编码。 3.一种修饰的EF1-α基因，其编码赋予黄瓜植物CMV抗性的蛋白质，其中所述蛋白质在所述黄瓜植物中表达，其特征在于所述基因包含选自以下的核苷酸序列： a)编码包含SEQ ID NO：8的蛋白质的核苷酸序列； b)包含SEQ ID NO：7的核苷酸序列； c)编码通过包含SEQ ID NO：8的蛋白质的一个或多个氨基酸的取代、缺失和/或添加而衍生的蛋白质的核苷酸序列， d)编码包含与SEQ ID NO：8至少95％相同的氨基酸序列的蛋白质的核苷酸序列； e)与SEQ ID NO：7至少95％相同的核苷酸序列； f)根据c)或d)的核苷酸序列，其中蛋白质在SEQ ID NO：8的位置372或与其对应的位置上包含甘氨酸(G)。 4.一种蛋白质，其赋予葫芦科植物特别是黄瓜植物对CMV的抗性，其中所述蛋白质在所述葫芦科植物特别是黄瓜植物中表达并且所述蛋白质由如权利要求3所述的基因编码。 5.一种葫芦科植物，特别是黄瓜植物，其包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因。 6.如权利要求5所述的植物，其纯合地包含修饰的ABCB9基因，其中所述植物对CMV具有抗性。 7.如权利要求5和6所述的植物，进一步包含如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因。 8.如权利要求5、6或7所述的植物，其纯合地包含修饰的EF1-α基因。 9.如权利要求5至8中任一项所述的植物的部分，所述植物部分包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因，以及任选如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因。 10.一种种子，其包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因，以及任选如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因。 11.如权利要求5至8中任一项所述的植物的组织培养物，所述组织培养物包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因，以及任选如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因。 12.一种用于鉴定包含修饰的ABCB9基因的黄瓜植物的标记物，其中所述标记物检测与SEQ ID NO：1的野生型ABCB9基因核苷酸序列相比位置1282上的修饰的核苷酸。 13.如权利要求12所述的标记物，其中所述标记物检测SEQ ID NO：3的位置1282上的腺嘌呤(A)。 14.如权利要求13所述的标记物，其包含SEQ ID NO：11。 15.一种用于鉴定包含修饰的EF1-α基因的黄瓜植物的标记物，其中所述标记物检测与SEQ ID NO：5的野生型EF1-α基因核苷酸序列相比位置1115上的修饰的核苷酸。 16.如权利要求15所述的标记物，其中所述标记物检测SEQ ID NO：7的位置1115上的鸟嘌呤(G)。 17.如权利要求16所述的标记物，其包含SEQ ID NO：12。 18.如权利要求12-17中任一项所述的标记物用于鉴定包含修饰的ABCB9基因和/或修饰的EF1-α基因的黄瓜植物的用途，特别是用于鉴定对CMV具有抗性的植物。 19.一种通过将如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因和任选地将如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因引入植物基因组来产生CMV抗性植物的方法。 20.一种选择CMV抗性植物的方法，其包括： a)鉴定如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因的存在和/或如权利要求3所述的修饰的EF-1α基因的存在， b)选择包含至少一种所述修饰的基因的植物； c)任选地测试所选植物的CMV抗性，和 d)如果植物表现出CMV抗性，则选择所述植物作为CMV抗性植物。 21.如权利要求20所述的方法，其中所述鉴定是通过使用如权利要求12至14所定义的标记物和/或如权利要求15至17所定义的标记物来执行的。 22.一种产生包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因的植物的方法，所述方法包括： a)将包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因的第一亲本植物与第二亲本植物杂交以获得F1群体， b)任选地进行一轮或多轮自交和/或与来自所述F1群体的植物的杂交以获得更远世代的群体， c)选择包含修饰的ABCB9基因的植物。 23.一种产生包含如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因的植物的方法，所述方法包括： a)将包含如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因的第一亲本植物与第二亲本植物杂交以获得F1群体， b)任选地进行一轮或多轮自交和/或与来自所述F1群体的植物的杂交以获得更远世代的群体， c)选择包含修饰的EF1-α基因的植物。 24.如权利要求22或23所述的方法，其还包括以下步骤： d)测试所选植物的CMV抗性； e)如果植物是CMV抗性的，则选择所述植物。 25.如权利要求22所述的方法，其中所述第二亲本植物还包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因。 26.如权利要求23所述的方法，其中所述第二亲本植物还包含如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因。 27.如权利要求22所述的方法，其中所述第一和/或第二亲本植物还包含如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因。 28.一种选择包含如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因的植物的方法，所述方法包括： a)测定植物核酸中如权利要求1所述的修饰的ABCB9基因的存在； b)鉴定包含修饰的ABCB9基因的植物，并选择所述植物。 29.一种选择包含修饰的EF1-α基因的植物的方法，所述方法包括： a)测定植物核酸中如权利要求3所述的修饰的EF1-α基因的存在， b)鉴定包含修饰的EF1-α基因的植物，并选择所述植物。