OsGG1基因在构建抗病性水稻中的应用
本发明公开OsGG1基因在构建抗病性水稻中的应用，本发明鉴定了一个新的提高水稻广谱抗病性的新基因OsGG1，通过过表达OsGG1可以提高水稻的抗病性。本发明方法可扩展到其他涉及OsGG1基因启动子突变而提高OsGG1基因表达的来提高水稻的广谱抗病性。同时，根据本研究的实验结果也可以在水稻的遗传资源库或者自然界中筛选OsGG1基因不高表达的单倍型，以筛选新的抗病水稻品种。该发明在我国以及世界面临严重的作物病害情况下具有重要意义，对培育高抗病水稻品种具有强有力的参考价值。
发明专利
CN202311508876.2
2023-11-14
CN117568394A
2024-02-20
C12N15/84(2006.01)
浙江大学
寿惠霞;郭润泽
310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号
杭州天正专利事务所有限公司
黄美娟%黄竞云
浙江;33
1.一种OsGG1基因在构建抗病性水稻中的应用，其特征在于：所述OsGG1基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。 2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述水稻为日本晴水稻(Oryza sativaL.japonica,cv Nipponbare)。 3.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述OsGG1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO:2所示。 4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述应用为：以所述OsGG1基因构建过表达重组质粒，利用农杆菌转化法将所述过表达重组质粒转入所述水稻中，得到抗病性水稻。 5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：所述重组质粒的载体为pTF101。 6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：所述过表达重组质粒上，OsGG1基因采用的启动子为CaMV35S启动子或者如SEQ ID NO:4所示的启动子。 7.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：所述农杆菌转化法采用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105。 8.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述应用为：所述过表达重组质粒采用如下方法构建： (1)以日本晴水稻(Oryza sativa L.japonica,cv Nipponbare)的基因组DNA为模板，采用引物对pTF101-proOsGG1-OsGG1-GFP-F和pTF101-proOsGG1-OsGG1-GFP-R进行PCR扩增，得到携带启动子的OsGG1基因片段； pTF101-proOsGG1-OsGG1-GFP-F： 5’-actgaatcaaaggccatgGGAATTATTCTGAATGATAT-3’ pTF101-proOsGG1-OsGG1-GFP-R： 5’-cgactctagaggatcccccTTTATCAGTTGCCAGAACAC-3’ (2)用限制性内切酶SacI和SmaI酶对载体pTF101进行双酶切，得到线性化载体； (3)将步骤(1)所述的携带启动子的OsGG1基因片段与步骤(2)所述的线性化载体进行无缝连接，得到所述过表达重组质粒。 9.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述过表达重组质粒采用如下方法构建： 1)以日本晴水稻(Oryza sativa L.japonica,cv Nipponbare)的总cDNA为模板，采用引物对pTF101-pro35S-OsGG1-GFP-F和pTF101-pro35S-OsGG1-GFP-R进行PCR扩增，得到OsGG1基因片段； pTF101-pro35S-OsGG1-GFP-F： 5’-tagatcagcccacgagctATGGCTTCCTCGACCCAG-3’ pTF101-pro35S-OsGG1-GFP-R： 5’-cgactctagaggatcccccTTTATCAGTTGCCAGAACAC-3’ 2)用限制性内切酶NcoI和SmaI酶对载体pTF101进行双酶切，得到线性化载体； 3)将步骤1)所述的OsGG1基因片段与步骤2)所述的线性化载体进行无缝连接，得到所述过表达重组质粒。 10.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述农杆菌转化法为： S1：将所述过表达重组质粒通过电激法转入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105，得到转基因农杆菌； S2:以日本晴水稻(Oryza sativa L.japonica,cv Nipponbare)的种子作为外植体诱导成愈伤组织，以步骤S1所述的转基因农杆菌为侵染菌使用农杆菌侵染转化法，将目的基因表达框转入水稻的基因组中，所得侵染后的水稻愈伤组织使用含有50mg/mL潮霉素的筛选培养基培养40天，每20天换一次新鲜的培养基，得到具有抗性的水稻愈伤组织； S3:将步骤S2所述的具有抗性的水稻愈伤组织转移到分化培养基培养40天，每20天换一次新鲜的分化培养基；所得分化的水稻苗转移至生根培养基中培养，待根长出后通过PCR鉴定，得到所述抗病性水稻。