PRPP合成酶突变体及其在高效合成NAD及NADP辅酶中的应用
本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及PRPP合成酶突变体及其在高效合成NAD及NADP辅酶中的应用。本发明构建的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体与野生型酶相比，酶活力提高了1.4～9.8倍，能显著降低酶的使用量，降低发酵容量和成本；且能极大缩短反应时间，降低ADP对酶活的影响，能够满足采用生物酶法制备NAD和NADP的大规模工业化生产的需求，具有广泛的应用前景。
发明专利
CN202311370776.8
2023-10-23
CN117417915A
2024-01-19
C12N9/12(2006.01)
浙江工业大学
薛亚平;洪健;沈其;程峰;郑裕国
310014 浙江省杭州市拱墅区潮王路18号
浙江千克知识产权代理有限公司
冷红梅
浙江;33
1.一种磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体，其特征在于，所述磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体是将如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的第111位、第187位、第309位进行单突变或多点联合突变后获得。 2.如权利要求1所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体，其特征在于，所述磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体是将如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列突变为下列之一：(1)第111位谷氨酸突变变为天冬氨酸、组氨酸或甲硫氨酸；(2)第187位天冬氨酸突变为丙氨酸、组氨酸、苏氨酸或谷氨酰胺；(3)第309位赖氨酸突变为精氨酸、天冬氨酸、组氨酸、亮氨酸；(4)第111位谷氨酸突变为组氨酸、第187位天冬氨酸突变为谷氨酰胺；(5)第187位天冬氨酸突变为丙氨酸、第309位赖氨酸突变为组氨酸；(6)第187位天冬氨酸突变为丙氨酸、第309位赖氨酸突变为精氨酸；(7)第111位谷氨酸突变为组氨酸、第187位天冬氨酸突变为谷氨酰胺、第309位赖氨酸突变为天冬氨酸。 3.如权利要求1或2所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体，其特征在于，所述磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体是将如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的第111位谷氨酸突变为组氨酸、第187位天冬氨酸突变为谷氨酰胺、第309位赖氨酸突变为天冬氨酸。 4.如权利要求3所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体，其特征在于，所述磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.26所示。 5.如权利要求4所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体，其特征在于，编码所述磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示。 6.一种含有编码如权利要求1～5中任意一项所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体的基因的重组载体。 7.一种含有编码如权利要求1～5中任意一项所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体的基因的基因工程菌。 8.权利要求1～5中任意一项所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体在合成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中的应用。 9.权利要求1～5中任意一项所述的磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体在合成磷酸化物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸中的应用。 10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，以磷酸核糖焦磷酸合成酶突变体、烟酰胺磷酸核糖基转移酶、多聚磷酸激酶、烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶为催化剂，以5-磷酸核糖、腺苷三磷酸和烟酰胺为底物，加入氯化镁和多聚磷酸盐，以pH7.5的缓冲液为反应介质，在37℃下反应，获得磷酸化物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。