OsZNF9基因提高水稻耐盐的方法及应用

摘要：

本发明公开了OsZNF9基因提高水稻耐盐的方法及应用，所述方法包括：降低OsZNF9基因在水稻体内的表达或将OsZNF9基因在水稻体内敲除，所述OsZNF9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过在水稻体内差异表达OsZNF9基因发现：水稻体内敲除OsZNF9，水稻的耐盐性显著提升，其存活率明显高于粤泰B(YB)；在水稻体内过表达OsZNF9，水稻的耐盐性明显下降，其存活率低于YB。表明OsZNF9与水稻耐盐密切相关，降低OsZNF9的表达量可以提高水稻耐盐。因此OsZNF9基因为利用分子标记辅助育种及利用基因工程的方法培育水稻耐盐新品种提供了强有力的手段和工具，具有巨大的应用潜力。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311346144.8

申请日期：2023-10-18

公开/公告号：CN117343955A

公开/公告日：2024-01-05

主分类号：C12N15/84(2006.01)

申请/专利权人:武汉大学

发明/设计人:李绍清;袁焕然;程明星

主申请人地址:430072 湖北省武汉市武昌区八一路299号

专利代理机构:武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙)

代理人:常海涛

国别省市代码:湖北;42

权利要求：

1.一种提高水稻耐盐的方法，其特征在于，所述方法包括：降低OsZNF9基因在水稻体内的表达或将OsZNF9基因在水稻体内敲除，或降低OsZNF9蛋白在水稻体内的活性；其中，所述OsZNF9基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。 2.根据权利要求1所述的提高水稻耐盐的方法，其特征在于，所述将OsZNF9基因在水稻体内敲除，包括：构建OsZNF9基因敲除载体，将其转化到水稻组织或细胞中。 3.根据权利要求2所述的提高水稻耐盐的方法，其特征在于，所述OsZNF9基因敲除载体的基础载体包括作物改造载体，所述作物改造载体包括双元农杆菌载体和用于作物微弹轰击的载体中的一种，所述双元农杆菌载体包括pYLCRISPR/Cas9Pubi-B、pYLCRISPR/Cas9P35S-H、pYLCRISPR/Cas9P35S-N或其他基因编辑技术载体；所述转化方法包括显微注射、农杆菌街道的遗传转化、通过Ti质粒、Ri质粒或病毒载体中的一种。 4.根据权利要求1所述的提高水稻耐盐的方法，其特征在于，所述将OsZNF9基因在水稻体内敲除，包括： 以OsZNF9基因上的CDS区域序列为靶标，设计敲除位点，利用CRISPR/Cas9系统对该基因进行编辑，利用Overlapping PCR法构建gRNA表达盒，将表达盒克隆到pYLCRISPR/Cas9载体上，得到含有敲除位点的OsZNF9-KO敲除载体； 将敲除载体OsZNF9-KO转入EHA105农杆菌中，利用敲除载体及所述农杆菌自身特性筛选得到用于侵染水稻组织的阳性农杆菌菌株； 将所述阳性农杆菌菌株侵染水稻愈伤组织，在潮霉素的筛选培养基上暗培养，获得阳性转基因愈伤组织； 将所述阳性愈伤组织进行分化、生根、移栽培养获得T0代转基因植株； 通过分子标记检测以及水稻栽培方法获得水稻耐盐性提高的T1代植株。 5.一种参与水稻耐盐调控的OsZNF9基因，其特征在于，所述OsZNF9基因具有如SEQ IDNO.3所示的核苷酸序列。 6.一种包含权利要求5所述OsZNF9基因的敲除位点的敲除载体。 7.一种包含权利要求6所述敲除载体的转化体、转基因系。 8.一种权利要求5所述的OsZNF9基因、权利要求6所述的敲除载体或权利要求7所述的转化体、转基因系在提高水稻耐盐性或培育水稻耐盐品种上的应用。 9.权利要求5所述的OsZNF9基因在单子叶禾本科作物中的同源基因在提高单子叶禾本科作物耐盐中的应用。 10.OsZNF9基因作为分子标记在水稻育种中的应用。