S2饲养细胞、制备方法及其应用

摘要：

本发明公开一种S2饲养细胞、制备方法及其应用，S2饲养细胞中含有表达CD3/CD28抗体Fab段的基因序列，所述基因序列如SEQ ID NO:1所示。将该目的基因转染至昆虫S2细胞中，得S2饲养细胞，S2饲养细胞将CD3/CD28抗体Fab段表达于细胞表面，能够有效活化和扩增T细胞，相较于现有技术，本发明的技术方案不需要磁珠或抗体包被，不需要抗体纯化等步骤，降低了T细胞活化和扩增的成本。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202311280144.2

申请日期：2023-09-28

公开/公告号：CN117448255A

公开/公告日：2024-01-26

主分类号：C12N5/07(2010.01)

申请/专利权人:深圳市龙华区人民医院

发明/设计人:郑沛林;周海蓉;仝理想;章志福;徐婷婷

主申请人地址:518000 广东省深圳市龙华区龙华街道景龙建设路38号、景龙建设路70号(艾柏士楼商办楼首层106号商铺、一楼分隔北侧房屋、二楼房屋及三楼房屋)和景龙建设路74号(允强商厦整栋)

专利代理机构:深圳市世纪恒程知识产权代理事务所

代理人:龚健

国别省市代码:广东;44

权利要求：

1.一种S2饲养细胞，其特征在于，所述S2饲养细胞中含有表达CD3/CD28抗体Fab段的基因序列，所述基因序列如SEQ ID NO:1所示。 2.一种所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S10、将联合了FLAG标签的权利要求1所述的基因序列克隆到表达载体中，得重组载体； S20、将所述重组载体和抗性质粒均转染至昆虫S2细胞中，得S2饲养细胞。 3.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述的表达载体为pAc5.1/V5-His A。 4.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，所述抗性质粒为pCoBlast质粒。 5.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤S10中，所述FLAG标签的基因序列如SEQ ID NO:2所示。 6.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，步骤S10包括： S11、对原有的联合了FLAG标签的CD3/CD28抗体Fab段的基因序列进行密码子优化，并合成如SEQ ID NO:1所示的基因序列； S12、根据SEQ ID NO:1所示的基因序列设计引物； S13、通过PCR扩增技术扩增，得CD28/CD3抗体Fab段的基因序列； S14、将PCR后的CD28/CD3抗体Fab段的基因和所述表达载体通过无缝克隆进行连接，得重组载体。 7.如权利要求6所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，在步骤S12中，所述引物包括： P1：5'-TCCAGAGACCCCGGATCGGGGTACCATGCAGGTGCAACTAGTGCAGA G-3'； P2：5'-AGGCTGATCAGCGGGTTTAAACTCACAAATGACTCAGGAAACACA-3'； P3 5'-TGAGTTTAAACCCGCTGATCAGCCT-3'； P4 5'-GGTACCCCGATCCGGGGTCTCTGGA-3'。 8.如权利要求6所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，所述原有的联合了FLAG标签的CD3/CD28抗体Fab段的基因序列如SEQ ID NO:3所示。 9.如权利要求2所述的S2饲养细胞的制备方法，其特征在于，步骤S20包括： S21、将所述重组载体转染细菌感受态细胞，得转染细胞； S22、抽提所述转染细胞中的所述重组载体； S23、将步骤S22中抽提获得的所述重组载体与抗性质粒同时转染至昆虫S2细胞中，得S2饲养细胞。 10.如权利要求9所述的S2饲养细胞在制备活化和扩增T细胞制剂中的应用。