miR167在提高百脉根耐寒性方面的应用和方法
本发明提供miR167在提高百脉根耐寒性方面的应用和方法。本发明发现沉默miR167在百脉根中的表达，有利于提高miR167靶基因LjARF6和LjARF8的表达，提高百脉根的耐寒性。基于上述发现，本发明基于短串联靶标模拟技术，合成并构建了短串联靶标模拟序列LjSTTM167，其可以识别并结合百脉根内源性miR167，从而下调其表达。通过冷胁迫处理结果表明，LjSTTM167转基因植株与野生型植株相比，具有更高的存活率和更低的电导率，有利于提高百脉根的耐寒性，为百脉根耐寒品种的推广提供了重要的基础。
发明专利
CN202311268566.8
2023-09-28
CN117363616A
2024-01-09
C12N15/113(2010.01)
华东师范大学
晏军;赵君苇;黄佳玉
200062 上海市普陀区中山北路3663号
上海宛林专利代理事务所(普通合伙)
董艳慧
上海;31
1.miR167在提高百脉根耐寒性方面的应用，其特征在于，沉默miR167在百脉根中的表达，所述miR167的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。 2.一种短串联靶标模拟序列，其特征在于，所述短串联靶标模拟序列为编码抑制miR167的核酸分子，所述miR167的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述短串联靶标模拟序列的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。 3.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包括权利要求2所述的短串联靶标模拟序列。 4.一种重组转化体，其特征在于，所述重组转化体包括权利要求3所述的重组表达载体。 5.一种转基因百脉根，其特征在于，所述转基因百脉根能够表达权利要求2所述的短串联靶标模拟序列。 6.权利要求2所述的短串联靶标模拟序列在提高百脉根耐寒性方面的应用。 7.一种提高百脉根耐寒性的方法，其特征在于，沉默百脉根中权利要求1所述的miR167的表达，获得耐寒性高于百脉根的转基因百脉根。 8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，通过权利要求2所述的短串联靶标模拟序列，沉默百脉根中所述miR167的表达。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，通过权利要求2所述的短串联靶标模拟序列，沉默百脉根中所述miR167的表达，具体包括： 将所述短串联靶标模拟序列连接到表达载体上，得到重组表达载体； 将所述重组表达载体转入农杆菌中，得到重组转化体； 将所述重组转化体侵染百脉根，并培养获得转基因百脉根。 10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述转基因百脉根的耐寒温度为-2℃，所述转基因百脉根在-2℃下培养48h后的存活率高于45％。