Neuroligin-2蛋白敲低及其应用
本发明属于神经生物医药技术领域，公开了一种Neuroligin‑2蛋白敲低及其应用，包括利用特异性shRNA序列，即F:GGAGCTAGTGGACCAGGATGT和R:CCTCGATCACCTGGTCCTACA，构建适当的载体，以及病毒复制和纯化步骤，实现高效的目标蛋白敲低。通过神经元调节蛋白neuroligin‑2的敲低，我们有望开辟新的神经学研究领域，并为神经疾病的治疗提供创新的解决方案。
发明专利
CN202311258973.0
2023-09-27
CN117448325A
2024-01-26
C12N15/113(2010.01)
南昌大学
刘伟柱;潘秉兴;张文华;刘甜;王志浩
330031 江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号
重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙)
于跃
江西;36
1.一种Neuroligin-2蛋白敲低的方法，其特征在于，利用shRNA序列构建病毒用于敲低Neuroligin-2蛋白； 所述shRNA序列为F:GGAGCTAGTGGACCAGGATGT和 R:CCTCGATCACCTGGTCCTACA。 2.根据权利要求1的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤一，构建表达载体，通过引物退火合成shRNA序列，并将其克隆到慢病毒表达载体中； 步骤二，将构建的载体导入适合病毒复制的宿主细胞中； 步骤三，从感染的宿主细胞中纯化Neuroligin-2蛋白敲低病毒； 步骤四，通过Westernblot或定量PCR验证目标蛋白的敲低效果。 3.根据权利要求2的方法，其特征在于，所述表达载体构建方法包括采用引物退火合成shRNA序列，并将其克隆到慢病毒表达载体中。 4.根据权利要求2或3的方法，其特征在于，所述载体包括报告基因或标签。 5.根据权利要求2的方法，其特征在于，确保病毒载体在宿主细胞中得到复制和扩散的步骤通过适当的培养和扩增实现。 6.根据权利要求2的方法，其特征在于，病毒纯化方法包括离心、超滤和柱层析步骤。 7.根据权利要求2的方法，其特征在于，将纯化的病毒样品用于感染目标细胞系，并通过Westernblot或定量PCR来验证目标蛋白的敲低效果。 8.一种敲低大脑皮层神经细胞中的Neuroligin-2蛋白，其特征在于，包括： 1)步骤一：构建表达载体 使用特定的引物F:GGAGCTAGTGGACCAGGATGT 和R:CCTCGATCACCTGGTCCTACA合成shRNA序列； 该shRNA序列随后被克隆到慢病毒表达载体pLKO.1中； 2)步骤二：载体转染到宿主细胞 采用脂质体介导的方法将构建好的载体转染到293T细胞中，作为病毒复制的宿主细胞； 3)步骤三：病毒纯化 通过离心和超滤的方式从转染后的293T细胞中纯化出Neuroligin-2蛋白敲低病毒； 4)步骤四：验证敲低效果 将纯化的病毒用于感染大脑皮层神经细胞；通过Western blot方法，验证Neuroligin-2蛋白的敲低效果。 9.一种Neuroligin-2蛋白敲低在神经系统疾病治疗和药物研发的应用，其特征在于，利用权利要求1至7中的任一项方法进行Neuroligin-2蛋白的敲低。