PET降解酶PET-mh183/208突变体及其编码基因、工程菌和应用
本发明属于酶工程技术领域，具体涉及一种PET降解酶PET‑mh183/208突变体及其编码基因、重组质粒、工程菌和应用。本发明提供的PET降解酶PET‑mh183/208突变体是将氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白质中第183和208位的氨基酸共同进行突变而得，与氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白质相比，该突变体对低结晶度和高结晶度PET均具有较高的降解活性，且TPA和MHET产量均较高，可用于不同结晶度PET的规模转化生物降解和单体回收。本发明还提供了编码该突变体的编码基因以及含有该编码基因的重组质粒和含有该重组质粒的工程菌及其应用。
发明专利
CN202311208972.5
2023-09-19
CN117448297A
2024-01-26
C12N9/18(2006.01)
源天生物科技(天津)有限公司
齐崴;尤生萍;王梦凡;郑昀欣;林伟;苏荣欣
300000 天津市滨海新区经济技术开发区洞庭路122号中海产业园C区三层309室
河北国维致远知识产权代理有限公司
任青
天津;12
1.一种PET降解酶PET-mh183/208突变体，其特征在于，所述PET降解酶PET-mh183/208突变体是将如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中第183和208位的氨基酸共同进行突变而得。 2.根据权利要求1所述的PET降解酶PET-mh183/208突变体，其特征在于，将第183位的氨基酸突变为L-酪氨酸；和/或 将第208位的氨基酸突变为L-苏氨酸。 3.权利要求1或2所述的PET降解酶PET-mh183/208突变体在水解PET中的应用，其特征在于，向80～120mM、pH值为7.5～8.5的磷酸钾缓冲液中加入所述PET降解酶PET-mh183/208突变体至终浓度为5～15μg/mL，在65～75℃，100～220rpm条件下进行PET降解。 4.编码权利要求1所述的PET降解酶PET-mh183/208突变体的基因，其特征在于，所述PET降解酶PET-mh183/208突变体的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，其核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。 5.含有权利要求4所述核苷酸序列的重组质粒。 6.权利要求5所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，以权利要求4所述核苷酸序列为模板，利用对应引物构建单点突变，先通过PCR反应对目的基因进行指数扩增，然后利用限制性内切酶Dpn I去除模板链，利用接着DNA连接酶快速环化PCR产物，获得重组质粒。 7.用权利要求5所述的重组质粒构建的工程菌。 8.根据权利要求7所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠杆菌。 9.权利要求8所述的工程菌的构建方法，其特征在于，将权利要求5所述重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细胞，涂布于氨苄青霉素平板培养基，得到阳性重组子，即为所述工程菌。 10.权利要求7或8所述的工程菌在降解PET中的应用。