Streptomyces bobili KQ-K6产蒽醌类化合物及其应用
本发明公开了Streptomyces bobiliKQ‑K6菌株能发酵产生具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物，本发明从新疆马铃薯疮痂链霉菌中分离获得一株Streptomyces bobili KQ‑K6，将该菌株发酵培养，经过乙酸乙酯反复萃取，得到粗提物，粗提物过硅胶柱并通过高效液相色谱分离纯化获得具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物，经抗肿瘤活性实验验证表明，该化合物对人结肠癌细胞HCT‑116和乳腺癌细胞株2316的抑制率分别为88.63％和80.96％，IC50分别为9.83μM和12.61μM，表明本发明分离纯化得到的化合物可用来制备抑制结肠癌和乳腺癌细胞株的抗肿瘤药物。
发明专利
CN202311208751.8
2023-09-18
CN117343866A
2024-01-05
C12N1/20(2006.01)
新疆农业科学院微生物应用研究所(中国新疆—亚美尼亚生物工程研究开发中心)
宋素琴;陈勇;候新强;包晓玮;马忠俊;刘晓禄;王则玉;徐李娟;郭瑞;汪雪晶
830091 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区南昌路403号
西安鼎迈知识产权代理事务所(普通合伙)
张源
新疆;65
1.一株高产具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物的菌株Streptomyces bobili KQ-K6，其特征在于，所述菌株Streptomyces bobili KQ-K6保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.27670，菌株Streptomyces bobiliKQ-K6的基因序列如SEQ ID NO：1所示。 2.一种具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物，其特征在于，利用如权利要求1所述的高产具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物的菌株Streptomyces bobili KQ-K6生产的化合物结构如式(Ⅰ)所示： 3.如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤： (1)将保藏的菌株Streptomyces bobili KQ-K6接种至500mL锥形瓶中，每瓶含200mL专用液体培养基，于28℃、180rpm摇床培养3-4d，得到该菌株的种子液； (2)取步骤(1)所得菌株种子液2mL接种至专用液体培养基中，于28℃、180rpm摇床培养10d，得到菌株的液体发酵液； (3)将步骤(2)所得液体发酵液上清液用乙酸乙酯反复萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩得到粗提物； (4)将步骤(3)所得粗提物过硅胶柱梯度洗脱，采用硅胶100-200目1:1.5拌样，300-400目硅胶1:20装填硅胶柱，洗脱体系为石油醚:乙酸乙酯(PE:EA)溶液和二氯甲烷:甲醇(D:M)溶液，PE:EA的体积比为10:1,5:1,1:1；D:M的体积比为40:1,30:1,20:1,10:1,5:1，0:1，根据分析液相色谱条件，经过制备型高效液相色谱纯化，得到具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物。 4.如权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述的专用液体培养基为：可溶性淀粉20g，硫酸镁0.5g，氯化钠0.5g，磷酸氢二钾0.5g，硝酸钾1.0g，硫酸亚铁0.01g，水1000mL，pH＝7.2，121℃灭菌20min获得。 5.如权利要求3所述的具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述高效液相色谱纯化中，流动相条件为70％-100％甲醇:水，洗脱时间为40min，流速为10mL/min，检测波长λ＝230nm；将旋瓶用甲醇反复润洗后，收集31min的馏分，经过旋蒸，滴加适量甲醇使其充分溶解，获得单体化合物K6-6为0.9mg，tR＝31min，单体化合物纯度为91％。 6.如权利要求2所述的具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 7.如权利要求6所述具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述蒽醌类化合物在制备抑制结肠癌或乳腺癌药物中的应用，为治疗肿瘤提供天然蒽醌类化合物。 8.如权利要求1所述的高产具有抗肿瘤活性的蒽醌类化合物的菌株StreptomycesbobiliKQ-K6在制备抗肿瘤活性的蒽醌类化合物中的应用。