oahs基因缺失株及其在预防猪链球菌2型感染中的应用
本发明适用于基因工程技术领域，提供了oahs基因缺失株及其在预防猪链球菌2型感染中的应用，本发明制得的oahs基因缺失株，即SC19‑ΔOAHS具有非常低的毒力，基本为无毒株；以该突变株活菌大剂量免疫小鼠，对小鼠基本不具有感染损伤，并且在佐剂的辅助下，小鼠体内抗体效价明显升高，能够成功建立针对性的免疫保护；在正常的免疫程序后，建立的免疫保护能够帮助小鼠有效抵抗2型猪链球菌的感染，降低死亡率和体内细菌定植；SC19‑ΔOAHS的制备方法简单，短期之内即可制作，培养简单，且作为疫苗不需其他复杂的处理，洗菌后与佐剂混合即可使用。SC19‑ΔOAHS具有作为猪抗链球菌感染活菌疫苗的潜力。
发明专利
CN202311156059.5
2023-09-08
CN117603892A
2024-02-27
C12N1/21(2006.01)
吉林大学
雷连成;吴桐;李娜;李丰阳;姜轩;梅纪坤
130012 吉林省长春市前进大街2699号
北京专赢专利代理有限公司
李斌
吉林;22
1.oahs基因缺失株，其特征在于，所述oahs基因缺失株的保藏编号为CCTCC NO: M20231488。 2.oahs基因缺失株的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： 利用引物Δoahs-F1/Δoahs-R1和Δoahs-F2/Δoahs-R2从SC19基因组中扩增出oahs基因的上游和下游片段； 利用重叠延伸PCR将oahs基因的上游和下游片段融合，并克隆到温敏自杀型链球菌穿梭载体pSET4s中，产生敲除载体pSET4s-Δoahs； 使用Gene Pulser XCell电穿孔系统将pSET4s-Δoahs电转化入SC19株，通过100 ug/ml的壮观霉素耐药性初步筛选基因交换株，再利用温度控制排出质粒； 将重组质粒pSET4s-Δoahs电转化至SC19菌株内后，重组质粒与细菌基因组之间发生同源重组，得到oahs基因缺失株。 3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，将pSET4s-Δoahs电转化入SC19株步骤的条件为：电压为2500 V，电容为25 μF，电阻为200 Ω，电转杯尺寸为1 mm。 4.oahs基因缺失株在制备预防猪链球菌2型感染药物中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将洗菌后的所述oahs基因缺失株与佐剂混合即可使用。