NAD+水平下降模型的建立方法及其在具有延缓衰老作用的中药及天然产物遴选中的应用
本发明涉及生物医药技术领域，具体公开了NAD+水平下降模型的建立方法及其在具有延缓衰老作用的中药及天然产物遴选中的应用。所述的NAD+水平下降模型的建立方法，其包含如下步骤：S01.取对数生长期的细胞，接种于细胞培养板中，然后加入培养基A进行培养；S02.培养基A培养结束后，弃掉培养基A，清洗后再加入培养基B进行培养；培养结束后即得NAD+水平下降模型。本发明首次提供了一种用于遴选具有增加NAD+水平或用于遴选具有延缓衰老作用的中药以及天然药物；对于进一步深入地研究中药以及天然药物的抗衰老活性成分具有重要的应用价值。
发明专利
CN202311145274.5
2023-09-06
CN117402810A
2024-01-16
C12N5/071(2010.01)
华南理工大学
梁明;任娇艳
510640 广东省广州市天河区五山路381号
广州粤高专利商标代理有限公司
林奕聪
广东;44
1.一种NAD+水平下降模型的建立方法，其特征在于，包含如下步骤： S01.取对数生长期的细胞，接种于细胞培养板中，然后加入培养基A进行培养； S02.培养基A培养结束后，弃掉培养基A，清洗后再加入培养基B进行培养；培养结束后即得NAD+水平下降模型。 2.根据权利要求1所述的一种NAD+水平下降模型的建立方法，其特征在于，步骤S01所述的细胞为HUVEC细胞；步骤S01所述细胞培养板中按15～25万/孔的接种量接种细胞；步骤S01所述培养基A由DMEM高糖培养基和胎牛血清组成；DMEM高糖培养基和胎牛血清的体积比为8～10:1。 3.根据权利要求1所述的一种NAD+水平下降模型的建立方法，其特征在于，步骤S01所述培养的条件为在37℃、5％CO2的培养箱中进行培养24h。 4.根据权利要求1所述的一种NAD+水平下降模型的建立方法，其特征在于，步骤S02所述培养基B为DMEM无糖培养基；步骤S02所述培养的条件为在37℃、5％CO2,94％N2,1％O2的培养箱中进行培养16h。 5.根据权利要求1所述的一种NAD+水平下降模型的建立方法，其特征在于，还包括NAD+浓度检测步骤；所述NAD+浓度检测步骤中采用NAD+/NADH检测试剂盒进行NAD+浓度检测。 6.根据权利要求1所述的一种NAD+水平下降模型的建立方法，其特征在于，所述的NAD+水平下降模型中采用50μM的NMN作为阳性对照药。 7.权利要求1～6任一项所述的一种的NAD+水平下降模型的建立方法建立得到的NAD+水平下降模型。 8.权利要求7所述NAD+水平下降模型在具有增加NAD+水平的中药及天然产物遴选中的应用，或在具有延缓衰老作用的中药及天然产物遴选中的应用。 9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，具体方法为： 将待测中药或天然产物遴选制成待测样品，加入到NAD+水平下降模型中进行培养，作为实验组； 同时将不加入待测样品的NAD+水平下降模型同时进行培养，作为模型组； 培养结束后检测实验组和模型组中的NAD+浓度；若实验组NAD+浓度高于模型组，则说明所述的中药或天然产物遴选具有增加NAD+水平作用或具有抗衰老作用。 10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述方法中还包括： 同时，配制50μM的NMN的阳性对照样品，加入到NAD+水平下降模型中进行培养，作为阳性对照组； 培养结束后检测实验组、阳性对照组和模型组中的NAD+浓度；若实验组NAD+浓度高于模型组，则说明所述的具有增加NAD+水平作用或具有抗衰老作用；若实验组NAD+浓度接近或高于阳性对照组，则说明所述的中药或天然产物遴选具有显著的增加NAD+水平作用或抗衰老作用。