SGK1突变体在抑制c-myc及下游信号蛋白中的应用
本发明公开了SGK1突变体在抑制c‑myc及下游信号蛋白中的应用，涉及分子生物学技术领域，其技术要点为：包括构建SGK1突变体和对照组细胞系、细胞增殖实验、蛋白表达分析、共培养实验。本发明分析了DLBCL中SGK1突变的位点，发现高突变频率的位点；在GCB亚型的SUDHL‑4细胞及其衍生细胞中，SGK1突变(A26G)并不直接影响肿瘤细胞的增殖能力，但会抑制SGK1下游蛋白NDGR‑1的磷酸化水平，从而影响c‑myc的表达。c‑myc的下降可能会影响肿瘤细胞CD47的表达，进而抑制“not eat me”信号，促进免疫系统中巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬；本发明还发现巨噬细胞和肿瘤细胞系及其衍生细胞系共培养后炎症因子I L‑6、I L‑1β和IL‑10的表达下降或受到明显抑制。
发明专利
CN202311128403.X
2023-11-23
CN117402913A
2024-01-16
C12N15/867(2006.01)
中国人民解放军海军军医大学
高路;张晓卿;陶怡;叶晨
200433 上海市杨浦区翔殷路800号
重庆市信立达专利代理事务所(普通合伙)
贺春林
上海;31
1.SGK1突变体在抑制c-myc及下游信号蛋白中的应用，其特征在于：包括构建SGK1突变体和对照组细胞系、细胞增殖实验、蛋白表达分析、共培养实验。 2.如权利要求1所述的SGK1突变体在抑制c-myc及下游信号蛋白中的应用，其特征是：所述构建SGK1突变体和对照组细胞系包括以下步骤： S1、使用基因测序确定SGK1突变位点，并进行相应的突变构建； S2、将SGK1突变体和对照组基因分别克隆到慢病毒载体中； S3、使用包装慢病毒的方法将SGK1突变体和对照组慢病毒分别转染到目标细胞系中； S4、筛选出稳定表达SGK1突变体和对照组的细胞系。 3.如权利要求1所述的SGK1突变体在抑制c-myc及下游信号蛋白中的应用，其特征是：所述细胞增殖实验包括以下步骤： M1、取相等数量的SGK1突变体和对照组细胞，分别种植在96孔板中； M2、在37℃、5％CO2的条件下培养96小时； M3、加入CCK8试剂并继续培养2-4小时； M4、使用酶标仪读取波长450nm的吸光值，比较SGK1突变体和对照组细胞的增殖情况。 4.如权利要求1所述的SGK1突变体在抑制c-myc及下游信号蛋白中的应用，其特征是：所述蛋白表达分析包括以下步骤： N1、收集相等数量的SGK1突变体和对照组细胞，裂解细胞并提取总蛋白； N2、将相同数量的总蛋白用SDS-PAGE进行电泳分离； N3、将分离后的蛋白转移到膜上，进行Western Blot分析； N4、检测蛋白的表达情况。 5.如权利要求1所述的SGK1突变体在抑制c-myc及下游信号蛋白中的应用，其特征是：所述共培养实验包括以下步骤： L1、取相同数量的SGK1突变体细胞和对照组细胞，与THP-1细胞共培养48小时； L2、使用流式细胞技术分析肿瘤细胞对THP-1细胞的杀伤作用； L3、取培养上清，与新鲜培养基等比例加入THP-1细胞，共培养48小时后，使用流式细胞技术检测THP-1细胞的凋亡情况； L4、取培养上清，使用ELISA等方法检测细胞因子的表达情况。