MhEML4基因克隆及其在种子败育中的应用

摘要：

本发明涉及MhEML4基因克隆及其在种子败育中的应用；所述的克隆方法包括使用的引物对，为MhEML4‑F、MhEML4‑R。本发明主要基于利用MhEML4转基因手段获得无籽苹果。与野生型WT番茄相比，MhEML4异源表达转基因番茄在绿熟期、转色期及红熟期中种子发生明显的败育；此外，利用瞬时表达系统注射pRI101‑MhEML4苹果后，转基因苹果果实中的种子败育率为98.1％，显著高于野生型苹果(WT)和pRI101空载体注射苹果。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202310846906.4

申请日期：2023-07-11

公开/公告号：CN117384914A

公开/公告日：2024-01-12

主分类号：C12N15/29(2006.01)

申请/专利权人:云南大学

发明/设计人:刘丹丹;徐明慧;杨煊禹;赵娜斐;刘才宁;李乾;王俊超

主申请人地址:650000 云南省昆明市五华区翠湖北路2号

专利代理机构:昆明盛鼎宏图知识产权代理事务所(特殊普通合伙)

代理人:王辉

国别省市代码:云南;53

权利要求：

1.一种MhEML4基因克隆方法，其特征在于，所述的克隆方法包括使用的引物对，为MhEML4-F ATGGGAAATCACAAGCACAACC； MhEML4-R TCAGTATGCCAGCCTACCAGC。 2.根据权利要求1所述的MhEML4基因克隆方法，其特征在于，所述引物对的PCR扩增反应体系为：cDNA模板1μL；MhEML4-F1μL；MhEML4-R1μL；Prime STAR Max DNA Ploymerase12.5μL；ddH2O Up to 20μL。 3.根据权利要求2所述的MhEML4基因克隆方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件，预变性：98℃180sec；变性：98℃10sec、退火：58℃15sec、延伸：72℃10sec，33个循环；终延伸：72℃10min。 4.如权利要求1或2或3所述MhEML4基因克隆方法获得的MhEML4基因，其特征在于，所述MhEML4基因序列为: ATGGGAAATCACAAGCACAACCATGGCATTGGATCTGAAAGGATGTCTCCAGCAACAAAACCTCATGGAAAGGATTTATGGGATATGGAGCTTCACGTTCACCATTTGGAAACAGAGGCATACCATGCTGTTCTGAAGGCTTTTAGCGCTCAATCTAATAACCTAACTTGGGCACGGGAGGCACTTATGACTGAGCTGCGGAGGGAACTTAATATTACAGATGATGAACACGGACAGCTGCTCATTAAGATTAAGTCAGATCAGTCAATCAAAGTGATAAGGGAATGGCGGAATGGTGCCCCTTGTGCTCAAGAGTATAGTGAGGATGCTCCTAGATATCCTCCTCCTCAAGTAGTGATCAATGCTGAACCGAGAAAACTGGAGACTTCACATCCTCCTGTTTCAAAGTCTCAGAAATGTGTCTCATACAGTCATTCTTGTAAAGAAACTGCTCCTTCTGCTGCACCAGATGCCCTCACCAAAAACACTAATGGAATGAAAGTCAAACGTGGAAAAAACTTAACTCAAGGAAACAGCCTTGTCGTGAGCTTGAAGTACCAAGGACAACTTAGCAATGATAAAAGTACCGACCCGGCAATGCTCTCCTCTGAGAAAGGCAGGCAGGCTATGAATATAAGTTGTCATAACCCTCAGCCTCAGGTTCCATCTGGTAGCAGAAGTACTGGACTGGTAAAACCCCAATCGAAGATAGGTTTCCGTGCACCTGGCTCTGATAATTTCAAGGAAAGTTGTGATTTTATTAGGATTCGTGCTACAGATCAAGTTATTCATCAGGCTTATAAGCTGCTAAGTCAAGAAAGAGTAGTCCCACTTCATATAGAAAAGGCAAAGCTAATCCTTCGAGAGCACGAAAGAGCTATCCTCGACGCACTTGATAAACTGCCTGATGTGTCAGAGATGGCCGATTCTCCCAAGCAAATGCAGCACAAGTATCCTCATGAGGAGCTTCCAGGAATGGGACGTGAAATGTTGATACGCAATGACTTGTATGGACAGGCTGGTAGGCTGGCATACTGA。 5.如权利要求4所述克隆方法获得的MhEML4基因的应用，其特征在于，所述MhEML4基因过量表达后诱导苹果产生无籽果实。 6.如权利要求4所述克隆方法获得的MhEML4基因的应用，其特征在于，所述MhEML4异源过量表达后会影响番茄果实种子的发育，产生无籽番茄。