ABCG4和/或ELOVL5作为靶点在开发或筛选或制备药物中的应用及方法
本发明提供一种ABCG4和/或ELOVL5作为靶点在开发或筛选或制备药物中的应用及方法，属于医药领域，提供ABCG4和/或ELOVL5作为靶点在开发或筛选或制备用于预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤药物中的应用、检测ABCG4和/或ELOVL5表达水平的试剂在制备用于诊断心肌梗死后神经炎症损伤或预后药物中的应用、一种筛选预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤药物的方法、脑心通方中用于预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤的药效物质基础的筛选方法。本发明通过对动态观察MI后神经炎症反应的激活，确认MI后小胶质细胞激活的时间点，通过动态的蛋白质组学技术发现MI后小胶质细胞激活的关键蛋白ABCG4和ELOVL5。
发明专利
CN202310603647.2
2023-05-25
CN117448437A
2024-01-26
C12Q1/6883(2018.01)
中国中医科学院中药研究所
唐仕欢;常梦丽;许静;雷雨心
100007 北京市东城区东直门内南小街16号
北京悦和知识产权代理有限公司
司丽春%刘青霞
北京;11
1.ABCG4和/或ELOVL5作为靶点在开发或筛选或制备用于预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤药物中的应用。 2.检测ABCG4和/或ELOVL5表达水平的试剂在制备用于诊断心肌梗死后神经炎症损伤或预后药物中的应用。 3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物能够抑制ABCG4和/或ELOVL5表达； 和/或，所述试剂选自特异性识别ABCG4和/或ELOVL5基因的寡核苷酸探针、特异性扩增ABCG4和/或ELOVL5基因的引物或特异性结合ABCG4和/或ELOVL5基因编码的蛋白的结合剂。 4.一种筛选预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤药物的方法，其特征在于，包括： 1)实验动物的分组及施药：心肌梗死模型鼠术后饲喂矿泉水作为模型组，心肌梗死模型鼠术后饲喂待选药物作为药物组； 2)喂7d后，取动物心脏或脑组织样本，提取总蛋白； 3)对总蛋白在37-81℃进行热变性，采用ABCG4和/或ELOVL5抗体进行WB印记检测ABCG4和/或ELOVL5蛋白的表达量； 在同等温度下，若药物组的蛋白稳定性高于模型组，将待筛选药物作为预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤的候选药物。 5.脑心通方中用于预防或治疗心肌梗死后神经炎症损伤的药效物质基础的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)分析获得脑心通方中的小分子化合物，利用Chem3D软件将脑心通方中的小分子化合物进行Minimize能量优化； 2)将ABCG4和/或ELOVL5受体蛋白的格式文件导入PyMOL Viewer，将其含有的溶剂分子、水分子和原配体小分子删除； 3)采用半柔性对接，小分子化合物和大蛋白受体经前处理后的结构文件按照顺序导入AutoDockTools，进行加氢、加电荷、保持大蛋白的刚性结构，接着使用AutoGrid进行能量格点计算，利用AutoDock进行虚拟对接； 4)选择与ABCG4和/或ELOVL5受体蛋白的结合能为负数、和/或与ABCG4和/或ELOVL5受体蛋白形成氢键的小分子化合物。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，筛选到的药效小分子化合物包括芍药苷、丹参酮ⅡA、阿魏酸。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中，通过PDB数据库下载ABCG4蛋白和/或ELOVL5蛋白的PDB格式文件； 步骤1)中，通过PubChem数据库下载脑心通方各小分子化合物的SDF格式文件。 8.根据权利要求4至7任一所述的方法，其特征在于，ABCG4和/或ELOVL5蛋白的筛选方法为： 1)实验动物的分组及施药：Sham组饲喂矿泉水，心肌梗死模型鼠术后饲喂矿泉水作为模型组，心肌梗死模型鼠术后饲喂药物作为药物组； 2)按时间点取动物样品的左心室和皮层组织，分别提取Sham组、模型组和药物组中的左心室和皮层组织的总蛋白，胰酶处理除盐； 3)采用DDA模式对总蛋白进行液质检测，生成质谱检测原始数据，构建DDA谱图库，将符合条件的肽段及子离子从谱图中挑选出来，生成Target List； 4)采用DIA模式对总蛋白进行液质检测，生成DIA质谱检测原始数据，根据步骤3)的Target List进行子离子匹配和峰面积计算，实现对肽段的同时定性和定量； 5)用T-test检验对步骤4)的蛋白质定量结果进行统计分析，将药物组和Sham组、模型组之间定量差异显著的蛋白质，可选地，按照p<0.05，|FC|≥2.0的原则定义为差异表达蛋白； 6)对步骤5)对鉴定到的蛋白质进行功能蛋白家族及通路分析，对差异表达蛋白进行火山图分析、聚类热图分析以及GO和KEGG的通路富集分析，并使用STRING在线数据库预测可能的蛋白质-蛋白质相互作用，获得PPI网络； 7)将心脑PPI网络导入Cytoscape中进行网络分析，保留degree大于中位数的蛋白，筛选得到左心室差异蛋白、大脑皮层差异蛋白，基于GeneCards数据库查询与脑部疾病相关度靠前的基因导入string数据库搜集二级关系蛋白，将该二级关系蛋白与大脑皮层差异蛋白进行Venn分析，将分析到的关键基因与左心室差异蛋白取交集，获得核心蛋白ABCG4和/或ELOVL5；可选地，脑部疾病包括神经炎症、阿尔兹海默症、认知功能损害中的一种或几种； 8)利用WB技术对ABCG4和ELOVL5在大脑皮层的表达量进行体内验证，将ABCG4和/或ELOVL5作为关键蛋白。 9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤5)中，差异表达蛋白的筛选中，将可信度在99％以上的谱肽作为可信PSMs，至少包含一个特有肽段的蛋白为可信蛋白，只保留可信的谱肽和蛋白，并做FDR验证，去除FDR大于1％的肽段和蛋白。 10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，步骤3)中，DDA模式液质检测中，质谱全扫描范围为m/z 350-1 500，一级质谱分辨率设为120 000(200m/z)，C-trap最大容量为3×106，C-trap最大注入时间为80ms；选取全扫描中离子强度TOP 40的母离子使用高能碰撞裂解方法碎裂，进行二级质谱检测，二级质谱分辨率设为15 000(200m/z)，C-trap最大容量为5×104，C-trap最大注入时间为45ms，肽段碎裂碰撞能量设为27％，阈强度设为1.1×104，动态排阻范围设为20s； 和/或，DIA模式液质检测中，以Nanospray FlexTM为离子源，设定离子喷雾电压为2.1kV，离子传输管温度为320℃，质谱全扫描范围为m/z 350-1 500，一级质谱分辨率设为60 000(200m/z)，C-trap最大容量为5×105，C-trap最大注入时间为20ms；使用HCD方法碎裂进行二级质谱检测，二级质谱分辨率设为30 000(200m/z)，C-trap最大容量为1×106，肽段碎裂碰撞能量设为27％。