1型鸭疫里默氏杆菌PCR鉴定引物及PCR鉴定方法

摘要：

本发明属于血清型检测方法领域，具体涉及一对1型鸭疫里默氏杆菌PCR鉴定引物，用于1型鸭疫里默氏杆菌血清型的PCR快速鉴定。其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明1型鸭疫里默氏杆菌PCR鉴定引物，用于1型鸭疫里默氏杆菌血清型的PCR快速鉴定，稳定、准确且快速。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202310514383.3

申请日期：2023-05-09

公开/公告号：CN116769938A

公开/公告日：2023-09-19

主分类号：C12Q1/689(2018.01)

申请/专利权人:聊城大学

发明/设计人:李玉保;祝希辉;曹胜亮;司振书;路建彪;刘成

主申请人地址:252000 山东省聊城市东昌府区柳园街道湖南路1号

专利代理机构:北京云嘉湃富知识产权代理有限公司

代理人:张亮

国别省市代码:山东;37

权利要求：

1.1型鸭疫里默氏杆菌PCR鉴定引物，其特征在于：其上游引物核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。 2.如权利要求1所述的1型鸭疫里默氏杆菌PCR鉴定引物，其特征在于：所述引物的目标基因group_2535的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。 3.1型鸭疫里默氏杆菌血清型的PCR快速鉴定方法，其特征在于：将待测的鸭疫里默氏杆菌纯培养物提取DNA，然后配置25μL PCR体系：12.5μL 2×Taq mix，8.5μL DEPC水，1μL上游引物SEQ ID NO:1，1μL下游引物SEQ ID NO:2，2μL DNA,将配好的PCR体系进行PCR扩增，扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性45s，50℃退火45s，72℃延伸45s，35个循环，72℃终延伸10min，取PCR产物5μL，在1％琼脂糖中进行凝胶电泳，电泳后使用凝胶成像仪进行观察，出现165bp目的条带者视为PCR阳性，可判定该菌为1型鸭疫里默氏杆菌。 4.一种权利要求1所述1型鸭疫里默氏杆菌PCR鉴定引物的筛选方法，其特征在于：将41株鸭疫里默氏杆菌进行血清型鉴定，获得血清型鉴定结果；41株鸭疫里默氏杆菌的全基因组数据使用PROKKA软件进行基因注释，获得注释文件；使用ROARY软件对注释后的文件进行泛基因组分析，获得泛基因组功能基因分布文件；将血清型分型结果与泛基因组功能基因分布文件使用SCOARY软件进行关联性分析，得到泛基因组中可能与血清型相关的基因；将分析得到的基因使用PRIMER软件设计引物；提取41株鸭疫里默氏杆菌DNA，使用所设计引物进行PCR扩增与凝胶电泳，比较电泳结果与血清分型结果一致性，从中筛选一致性较好引物作为最终鉴定血清型所用引物，最终得到1对引物，PCR鉴定结果与血清型鉴定结果完全一致，可作为1型鸭疫里默氏杆菌的PCR快速鉴定引物。