LAMP扩增产物的改进检测

摘要：

本发明涉及通过使用形成核酸聚合酶不会有效识别的双链体结构的核苷酸类似物来改进对来自环介导的扩增(LAMP)反应的扩增产物的检测的方法。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN202280085713.5

申请日期：2022-12-21

公开/公告号：CN118434883A

公开/公告日：2024-08-01

主分类号：C12Q1/6844(2006.01)

申请/专利权人:豪夫迈·罗氏有限公司

发明/设计人:R·塞基

主申请人地址:瑞士巴塞尔

专利代理机构:中国专利代理(香港)有限公司

代理人:权陆军%张华

国别省市代码:瑞士;CH

权利要求：

1.一种用于使用环介导的等温扩增(LAMP)来确定样品中靶核酸分子的存在或量的方法，所述方法包括： (a)将LAMP反应混合物、具有链置换特性的DNA聚合酶、含有所述靶核酸分子的样品组合；其中所述LAMP反应混合物包含： (i)4至6种引物的LAMP引物组，其包含两种内部引物(FIP和BIP)、两种外部引物(F3和B3)以及任选的一种或两种环引物(环F和/或环B)；其中所述FIP引物包含与所述靶核酸分子中的序列互补的引物序列(F2)以及与所述靶核酸分子中的序列不互补且位于所述引物序列的5'的尾序列(F1c)，并且其中所述尾序列用猝灭剂分子进行标记；以及 (ii)能够与所述FIP引物的所述尾序列杂交以形成双链体的检测探针(Fd)，其中所述检测探针用荧光分子进行标记，当所述检测探针与所述尾序列杂交时，所述荧光分子被所述猝灭剂分子猝灭，并且其中所述检测探针中超过80％的核苷酸在其核糖环的2'位置中被甲氧基取代(OMe取代的)； (b)在合适的测定法条件下通过LAMP扩增所述靶核酸分子，所述测定法条件允许通过所述LAMP反应和从所述尾序列置换所述检测探针的多个循环产生靶扩增子，从而释放所述荧光分子的猝灭以产生可检测的信号；和 (c)检测并任选地量化来自所述检测探针的所述信号，并由此确定所述样品中的所述靶核酸分子的存在或量。 2.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测探针中超过90％的核苷酸为OMe取代的。 3.根据权利要求2所述的方法，其中所述检测探针中的所有核苷酸均为OMe取代的。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中具有链置换特性的所述DNA聚合酶是Bst聚合酶。 5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述检测探针的浓度不超过200nM。 6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述样品含有多种靶核酸分子。 7.根据权利要求6所述的方法，其中所述LAMP反应混合物为能够扩增并检测多种靶核酸分子的多重反应混合物。 8.根据权利要求7所述的方法，其中所述多重反应混合物包含多种检测探针，每种探针用不同的荧光分子进行标记。