α-1,4-岩藻糖基化化合物的生产
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α-1,4-岩藻糖基化化合物的生产

引用
本发明属于合成生物学、代谢工程和细胞培养的技术领域。本发明描述了使用岩藻糖基转移酶生产包含Gal‑β1,3‑[Fuc‑α1,4]‑GlcNAc的岩藻糖基化化合物的方法,以及纯化所述岩藻糖基化化合物的方法,所述岩藻糖基转移酶对Gal‑β1,3‑GlcNAc(乳糖‑N‑二糖,LNB)和/或包含Gal‑β1,3‑GlcNAc的糖底物的Gal‑β1,3‑GlcNAc的N‑乙酰葡糖胺(GlcNAc)残基具有α‑1,4‑岩藻糖基转移酶活性。本发明还提供一种用于生产包含Gal‑β1,3‑[Fuc‑α1,4]‑GlcNAc的岩藻糖基化化合物的细胞。

发明专利

CN202280082545.4

2022-12-13

CN118414434A

2024-07-29

C12P19/18(2006.01)

因比奥斯公司

J·博普雷兹;K·梵德瓦勒;A·瓦考特兰

比利时

中国贸促会专利商标事务所有限公司

谢丽菲

比利时;BE

1.一种产生包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物的方法,所述方法包括以下步骤: a)提供 i)GDP-岩藻糖, ii)Gal-β1,3-GlcNAc(乳糖-N-二糖,LNB)和/或包含Gal-β1,3-GlcNAc的糖底物,任选地,所述LNB和/或糖底物与肽、蛋白质和/或脂质连接,和 iii)岩藻糖基转移酶,其中所述岩藻糖基转移酶对所述LNB和/或所述糖底物的Gal-β1,3-GlcNAc的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列, b)在所述岩藻糖基转移酶催化岩藻糖残基从所述GDP-岩藻糖以α-1,4-糖苷键转移到所述LNB和/或所述糖底物的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的条件下,使所述岩藻糖基转移酶和GDP-岩藻糖与所述LNB和/或糖底物接触,导致产生所述岩藻糖基化化合物, c)优选地,分离所述产生的岩藻糖基化化合物。 2.根据权利要求1所述的方法,其中所述岩藻糖基化化合物为三糖Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc(4-岩藻糖基乳糖-N-二糖,4-FLNB),任选地,所述4-FLNB与肽、蛋白质或脂质连接。 3.根据权利要求1所述的方法,其中所述岩藻糖基化化合物是糖类化合物,所述糖类化合物包含: -Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc与一个或多个单糖残基糖苷连接,任选地,所述包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的糖类化合物与肽、蛋白质和/或脂质连接, 和/或 -式Ra-[Rb]-[Re]-[Rf]-Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-[Rc]-GlcNAc-Rd,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的半乳糖(Gal)残基与Ra、Rb、Re和/或Rf基团糖苷连接,和/或其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的GlcNAc残基与Rc和/或Rd基团糖苷连接,并且其中所述Ra、Rb、Rc、Rd、Re和Rf基团中的任一个选自包含单糖、二糖和寡糖的列表。 4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物: -是寡糖,优选所述寡糖为哺乳动物乳寡糖(MMO),更优选为人乳寡糖(HMO),和/或 -是带负电荷的、优选唾液酸化的分子或是中性分子,优选带负电荷的、更优选唾液酸化的寡糖或是中性寡糖。 5.根据权利要求1、3或4中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基化化合物为具有式Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的GlcNAc残基与Rd基团糖苷连接,并且其中所述Rd基团选自包含单糖、二糖和寡糖的列表, 优选地,其中所述岩藻糖基化化合物为具有式Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的GlcNAc残基与所述Rd基团的β-糖苷键相连。 6.根据权利要求5所述的方法,其中所述岩藻糖基化化合物选自包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-Glc(LNFP-II,乳糖-N-岩藻五糖II)和Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-[Fuc-α1,3]-Glc(LNDFH-II,乳糖-N-二岩藻六糖II)的列表。 7.根据权利要求1、3-6中任一项所述的方法,其中所述包含Gal-β1,3-GlcNAc的糖底物为: -糖类,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc与一个或多个单糖残基糖苷连接,所述单糖残基不包括与所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基以α-1,4-糖苷键连接的岩藻糖残基,和/或 -包含式Ra-[Rb]-[Re]-[Rf]-Gal-β1,3-[Rg]-GlcNAc-Rd的糖类,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的半乳糖(Gal)残基与Ra、Rb、Re和/或Rf基团糖苷连接,和/或其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基与Rg和/或Rd基团糖苷连接,并且其中所述Ra、Rb、Rg、Rd、Re和Rf基团中的任一个选自包含单糖、二糖和寡糖的列表,所述单糖不包括Rg基团是与所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基以α-1,4-糖苷键连接的岩藻糖残基。 8.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述包含Gal-β1,3-GlcNAc的糖底物 -是寡糖,优选所述寡糖为哺乳动物乳寡糖(MMO),更优选为人乳寡糖(HMO),和/或 -是带负电荷的、优选唾液酸化的分子或是中性分子,优选带负电荷的、更优选唾液酸化的寡糖或是中性寡糖。 9.根据权利要求1、3-8中任一项所述的方法,其中所述糖底物为具有式Gal-β1,3-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基与Rd基团糖苷连接,并且其中所述Rd基团选自包含单糖、二糖和寡糖的列表, 优选地,其中,所述糖底物为具有式Gal-β1,3-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基与所述Rd基团的β-糖苷键相连。 10.根据权利要求9所述的方法,其中所述糖底物选自包含Gal-β1,3-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-Glc(LNT,乳糖-N-四糖)和Gal-β1,3-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-[Fuc-α1,3]-Glc(乳糖-N-岩藻五糖V,LNFP-V)的列表。 11.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶对下列具有额外的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性, a)所述糖底物的单糖残基,不包括所述糖底物的所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基,和/或 b)与所述糖底物不同的化合物,所述化合物选自包含单糖、不包括LNB的二糖和寡糖的列表,任选地所述化合物与肽、蛋白质和/或脂质连接。 12.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶对所述糖底物和/或与所述LNB和所述糖底物不同的化合物具有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,所述化合物选自包含单糖、不包括LNB的二糖和寡糖的列表,任选地所述化合物与肽、蛋白质和/或脂质连接。 13.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶对LNB的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 14.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 c) -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 15.根据权利要求14所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶对乳糖的葡萄糖(Glc)残基不具有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,或者对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性低于其对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含SEQ ID NO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 16.根据权利要求14所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶对乳糖的葡萄糖(Glc)残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性高于其对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含根据SEQ ID NO 17、13、14、15或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、13、14、15或23中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、13、14、15或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包括功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、13、14、15或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 17.根据权利要求1-13中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基具有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,以及 c)对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基没有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,或对所述LNT和/或LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性低于其对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,以及 d) -包含根据SEQ ID NO 09、10、11或12中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 09、10、11或12中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 09、10、11或12中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 09、10、11或12中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 18.根据权利要求1-13中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB和/或糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基没有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,或对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性低于其对i)LNB或ii)所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: c) -包含根据SEQ ID NO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 19.根据权利要求1-12中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 20.根据权利要求1-12、19中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶具有 a)对LNB的GlcNAc残基没有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,或对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性低于其对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基没有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,或对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性低于其对所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 c) -包含根据SEQ ID NO 18、19、20或04中任一个的多肽,优选SEQ ID NO 18、19或20,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 18、19、20或04中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,优选对SEQID NO 18、19或20中任一个的全长氨基酸序列具有46.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 18、19、20或04中任一个的多肽的功能片段,优选SEQ ID NO 18、19或20中任一个,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 18、19、20或04中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列,优选SEQ ID NO 18、19或20中任一个。 21.根据权利要求1-12、19中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基没有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,或对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性低于其对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性高于其对所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 c) -包含根据SEQ ID NO 16、21或22中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 16、21或22中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 16、21或22中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 16、21或22中的任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 22.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述岩藻糖基化化合物在无细胞系统中产生或由细胞产生,优选单个细胞,优选所述细胞为经代谢工程改造的细胞。 23.根据权利要求22所述的方法,其中所述方法包括以下步骤: i.提供表达所述岩藻糖基转移酶的细胞,以及 ii.提供GDP-岩藻糖,任选地所述GDP-岩藻糖由所述细胞产生,以及 iii.提供LNB和/或任一种或多种包含Gal-β1,3-GlcNAc的所述糖底物,任选地所述LNB和/或任一种或多种糖底物由所述细胞产生,以及 iv.在允许表达所述岩藻糖基转移酶的条件下培养和/或孵育所述细胞,任选地在允许产生所述GDP-岩藻糖和/或LNB和/或任一种或多种所述糖底物的条件下,从而产生所述岩藻糖基化化合物, v.优选地,将所述岩藻糖基化化合物与所述培养物分离。 24.一种经代谢工程改造的用于产生包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物的细胞,其中所述细胞能够表达,优选表达岩藻糖基转移酶,其特征在于,所述岩藻糖基转移酶(a)对乳糖-N-二糖(LNB)和/或包含所述Gal-β1,3-GlcNAc的糖底物的Gal-β1,3-GlcNAc的N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,任选地,所述LNB和/或糖底物与肽、蛋白质和/或脂质连接,并且(b): -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 25.根据权利要求24所述的细胞,其中所述岩藻糖基化化合物为三糖Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc(4-岩藻糖基乳糖-N-二糖,4-FLNB),任选地,所述4-FLNB与肽、蛋白质或脂质连接。 26.根据权利要求24所述的细胞,其中所述岩藻糖基化化合物是糖类,包含: -Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc与一个或多个单糖残基糖苷连接,任选地,包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的所述糖类与肽、蛋白质和/或脂质连接,和/或 -式Ra-[Rb]-[Re]-[Rf]-Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-[Rc]-GlcNAc-Rd,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的半乳糖(Gal)残基与Ra、Rb、Re和/或Rf基团糖苷连接,和/或其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的GlcNAc残基与Rc和/或Rd基团糖苷连接,并且其中所述Ra、Rb、Rc、Rd、Re和Rf基团中的任一个选自包含单糖、二糖和寡糖的列表。 27.根据权利要求24-26中任一项所述的细胞,其中所述包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物: -是寡糖,优选所述寡糖为哺乳动物乳寡糖(MMO),更优选为人乳寡糖(HMO),和/或 -是带负电荷的,优选唾液酸化的分子或是中性分子,其中所述岩藻糖基化化合物是带负电荷的,更优选唾液酸化的寡糖或是中性寡糖。 28.根据权利要求24、26或27中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基化化合物为具有式Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的GlcNAc残基与Rd基团糖苷连接,并且其中所述Rd基团选自包含单糖、二糖和寡糖的列表, 优选地,其中所述岩藻糖基化化合物为具有式Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的GlcNAc残基与所述Rd基团的β-糖苷键相连。 29.根据权利要求28所述的细胞,其中所述岩藻糖基化化合物选自包括Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-Glc(LNFP-II,乳糖-N-岩藻五糖II)和Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-[Fuc-α1,3]-Glc(LNDFH-II,乳糖-N-二岩藻六糖II)的列表。 30.根据权利要求24、26-28中任一项所述的细胞,其中包含Gal-β1,3-GlcNAc的所述糖底物为糖类,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc与一个或多个单糖残基糖苷连接,所述单糖残基不包括与所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基以α-1,4-糖苷键连接的岩藻糖残基。 31.根据权利要求24、26-30中任一项所述的细胞,其中所述包含Gal-β1,3-GlcNAc的糖底物是包含式Ra-[Rb]-[Re]-[Rf]-Gal-β1,3-[Rg]-GlcNAc-Rd的糖类,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的半乳糖(Gal)残基与Ra、Rb、Re和/或Rf基团糖苷连接,和/或其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基与Rg和/或Rd基团糖苷连接,并且其中所述Ra、Rb、Rg、Rd、Re和Rf基团中的任一个选自包含单糖、二糖和寡糖的列表,所述单糖不包括Rg基团是与所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基以α-1,4-糖苷键连接的岩藻糖残基。 32.根据权利要求24-31中任一项所述的细胞,其中所述包含Gal-β1,3-GlcNAc的糖底物: -是寡糖,优选所述寡糖为哺乳动物乳寡糖(MMO),更优选为人乳寡糖(HMO),和/或 -是带负电荷的、优选唾液酸化的分子或是中性分子,优选地,其中所述糖底物是带负电荷的、更优选唾液酸化的寡糖或是中性寡糖。 33.根据权利要求24、26-32中任一项所述的细胞,其中所述糖底物为具有式Gal-β1,3-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基与Rd基团糖苷连接,并且其中所述Rd基团选自包含单糖、二糖和寡糖的列表, 优选地,其中所述糖底物为具有式Gal-β1,3-GlcNAc-Rd的寡糖,其中所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基与所述Rd基团的β-糖苷键相连。 34.根据权利要求33所述的细胞,其中所述糖底物选自包含Gal-β1,3-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-Glc(LNT,乳糖-N-四糖)和Gal-β1,3-GlcNAc-β1,3-Gal-β1,4-[Fuc-α1,3]-Glc(乳糖-N-岩藻五糖V,LNFP-V)的列表。 35.根据权利要求24-34中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶对以下各项具有额外的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性, a)所述糖底物的单糖残基,不包括所述糖底物的所述Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基,和/或 b)与所述糖底物不同的化合物,所述化合物选自包含单糖、不包括LNB的二糖和寡糖的列表,任选地所述化合物与肽、蛋白质和/或脂质连接。 36.根据权利要求24-35中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶对所述糖底物和/或与所述LNB和所述糖底物不同的化合物具有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,所述化合物选自包含单糖、不包括LNB的二糖和寡糖的列表,任选地所述化合物与肽、蛋白质和/或脂质连接。 37.根据权利要求24-36中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶对LNB的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,并且: -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、09、10、11、12、13、14、15或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 38.根据权利要求24-37中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 c) -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、05、06、07、08、13、14、15或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 39.根据权利要求38所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶对乳糖的葡萄糖(Glc)残基不具有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,或者对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性低于其对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含SEQ ID NO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 01、02、03、05、06、07或08中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 40.根据权利要求38所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶对乳糖的葡萄糖(Glc)残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性高于其对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含根据SEQ ID NO 17、13、14、15或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、13、14、15或23中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、13、14、15或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、13、14、15或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 41.根据权利要求24-37中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基具有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,以及 c)对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基没有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,或对所述LNT和/或LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性低于其对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,以及 d) -包含根据SEQ ID NO 09、10、11或12中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 09、10、11或12中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 09、10、11或12中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 09、10、11或12中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 42.根据权利要求24-37中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB和/或糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基没有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,或对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性低于其对i)LNB或ii)所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: c) -包含根据SEQ ID NO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 01、02、03、04、05、06、07、08、18、19或20中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 43.根据权利要求24-36中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基具有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及: -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 17、01、02、03、04、05、06、07、08、14、15、16、18、19、20、21、22或23中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 44.根据权利要求24-36、43中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基没有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,或对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性低于其对所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基没有α-1,3-岩藻糖基转移酶活性,或对乳糖的Glc残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性低于其对所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 c) -包含根据SEQ ID NO 18、19、20或04中任一个的多肽,优选SEQ ID NO 18、19或20,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 18、19、20或04中任一个的全长氨基酸序列具有50.0%或更多的序列同一性,优选与SEQID NO 18、19或20中任一个的全长氨基酸序列具有46.0%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 18、19、20或04中任一个的多肽的功能片段,优选SEQ ID NO 18、19或20中任一个,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 18、19、20或04中任一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列,优选SEQ ID NO 18、19或20中任一个。 45.根据权利要求24-36、43中任一项所述的细胞,其中所述岩藻糖基转移酶: a)对LNB的GlcNAc残基没有α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,或对LNB的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性低于其对糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 b)对乳糖的葡萄糖(Glc)残基的α-1,3-岩藻糖基转移酶活性高于其对所述糖底物i)LNT和/或ii)LNFP-V的Gal-β1,3-GlcNAc的GlcNAc残基的α-1,4-岩藻糖基转移酶活性,以及 c) -包含根据SEQ ID NO 16、21或22中任一个的多肽,或 -是包含下列氨基酸序列或由下列氨基酸序列组成的多肽,所述氨基酸序列与SEQ IDNO 16、21或22中任一个的全长氨基酸序列具有52.50%或更多的序列同一性,或 -包含根据SEQ ID NO 16、21或22中任一个的多肽的功能片段,或 -包含功能片段,所述功能片段包含来自SEQ ID NO 16、21或22中的任何一个的至少10个连续氨基酸残基的氨基酸序列。 46.根据权利要求24-45中任一项所述的细胞,其中所述细胞在任一种所述岩藻糖基转移酶的表达或活性方面被修饰。 47.根据权利要求24-46中任一项所述的细胞,其中所述细胞能够产生一种或多种核苷酸活化糖,这些核苷酸活化糖选自包括UDP-N-乙酰葡糖胺(UDP-GlcNAc)、UDP-N-乙酰半乳糖胺(UDP-GalNAc)、UDP-N-乙酰甘露糖胺(UDP-ManNAc)、UDP-葡萄糖(UDP-Glc)、UDP-半乳糖(UDP-Gal)、GDP-甘露糖(GDP-Man)、GDP-岩藻糖(GDP-Fuc)、UDP-葡萄糖醛酸、UDP-半乳糖醛酸、UDP-2-乙酰氨基-2,6-二脱氧--L-阿拉伯糖-4-己酮糖、UDP-2-乙酰氨基-2,6-二脱氧--L-木糖-4-己酮糖、UDP-N-乙酰基-L-鼠李糖胺(UDP-L-RhaNAc或UDP-2-乙酰氨基-2,6-二脱氧-L-甘露糖)、dTDP-N-乙酰基岩藻糖胺、UDP-N-乙酰基岩藻糖胺(UDP-L-FucNAc或UDP-2-乙酰氨基-2,6-二脱氧-L-半乳糖)、UDP-N-乙酰基-L-脱氧塔罗糖胺(UDP-L-PneNAC或UDP-2-乙酰氨基-2,6-二脱氧-L-塔罗糖)、UDP-N-乙酰胞壁酸、UDP-N-乙酰基-L-奎诺糠胺(UDP-L-QuiNAc或UDP-2-乙酰氨基-2,6-二脱氧-L-葡萄糖)、CMP-唾液酸(CMP-Neu5Ac)、CMP-Neu4Ac、CMP-Neu5Ac9N3、CMP-Neu4,5Ac2、CMP-Neu5,7Ac2、CMP-Neu5,9Ac2、CMP-Neu5,7(8,9)Ac2、CMP-N-羟乙酰基神经氨酸(CMP-Neu5Gc)、GDP-鼠李糖和UDP-木糖的列表,和/或,其中所述细胞表达选自包括以下各项的列表的一种或多种多肽:甘露糖-6-磷酸异构酶、磷酸甘露糖变位酶、甘露糖-1-磷酸鸟苷酰基转移酶、GDP-甘露糖4,6-脱水酶、GDP-L-岩藻糖合酶、岩藻糖通透酶、岩藻糖激酶、GDP-岩藻糖焦磷酸化酶、岩藻糖-1-磷酸鸟苷酰基转移酶、L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸氨基转移酶、葡糖胺-6-磷酸脱氨酶、磷酸葡糖胺变位酶、N-乙酰葡糖胺-6-磷酸脱乙酰酶、N-酰基葡糖胺2-差向异构酶、UDP-N-乙酰葡糖胺2-差向异构酶、N-乙酰甘露糖胺-6-磷酸2-差向异构酶、葡糖胺6-磷酸N-乙酰转移酶、N-乙酰葡糖胺-6-磷酸磷酸酶、N-乙酰甘露糖胺-6-磷酸磷酸酶、N-乙酰甘露糖胺激酶、磷酸乙酰葡糖胺变位酶、N-乙酰葡糖胺-1-磷酸尿苷酰基转移酶、葡糖胺-1-磷酸乙酰基转移酶、N-乙酰神经氨酸合酶、N-乙酰神经氨酸裂合酶、N-酰基神经氨酸-9-磷酸合酶、N-酰基神经氨酸-9-磷酸磷酸酶、N-酰基神经氨酸胞苷酰基转移酶、半乳糖-1-差向异构酶、半乳糖激酶、葡萄糖激酶、半乳糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶、UDP-葡萄糖4-差向异构酶、葡萄糖-1-磷酸尿苷酰基转移酶、磷酸葡萄糖变位酶、UDP-N-乙酰葡糖胺4-差向异构酶、N-乙酰半乳糖胺激酶和UDP-N-乙酰半乳糖胺焦磷酸化酶,优选其中所述细胞在任一种所述多肽的表达或活性方面被修饰。 48.根据权利要求24-47中任一项所述的细胞,其中所述细胞表达选自包括以下各项的列表的一种或多种糖基转移酶:岩藻糖基转移酶、唾液酸转移酶、半乳糖基转移酶、葡糖基转移酶、甘露糖基转移酶、N-乙酰葡糖胺基转移酶、N-乙酰半乳糖胺基转移酶、N-乙酰甘露糖胺基转移酶、木糖基转移酶、葡糖醛酸基转移酶、半乳糖醛酸转移酶、葡糖胺基转移酶、N-羟乙酰基神经氨酰基转移酶、鼠李糖基转移酶、N-乙酰鼠李糖基转移酶、UDP-4-氨基-4,6-二脱氧-N-乙酰基-β-L-阿卓糖胺转氨酶、UDP-N-乙酰葡糖胺烯醇丙酮酰基转移酶和岩藻糖胺基转移酶, -优选地,所述岩藻糖基转移酶选自包括α-1,2-岩藻糖基转移酶、α-1,3-岩藻糖基转移酶、α-1,3/4-岩藻糖基转移酶、α-1,4-岩藻糖基转移酶和α-1,6-岩藻糖基转移酶的列表, -优选地,所述唾液酸转移酶选自包括α-2,3-唾液酸转移酶、α-2,6-唾液酸转移酶和α-2,8-唾液酸转移酶的列表, -优选地,所述半乳糖基转移酶选自包括β-1,3-半乳糖基转移酶、N-乙酰葡糖胺β-1,3-半乳糖基转移酶、β-1,4-半乳糖基转移酶、N-乙酰葡糖胺β-1,4-半乳糖基转移酶、α-1,3-半乳糖基转移酶和α-1,4-半乳糖基转移酶的列表, -优选地,所述葡糖基转移酶选自包括α-葡糖基转移酶、β-1,2-葡糖基转移酶、β-1,3-葡糖基转移酶和β-1,4-葡糖基转移酶的列表, -优选地,所述甘露糖基转移酶选自包括α-1,2-甘露糖基转移酶、α-1,3-甘露糖基转移酶和α-1,6-甘露糖基转移酶的列表, -优选地,所述N-乙酰葡糖胺基转移酶选自包括半乳糖苷β-1,3-N-乙酰葡糖胺基转移酶和β-1,6-N-乙酰葡糖胺基转移酶的列表, -优选地,所述N-乙酰半乳糖胺基转移酶是α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶, -优选地,所述细胞在任一种所述糖基转移酶的表达或活性方面被修饰。 49.根据权利要求24-48中任一项所述的细胞,其中所述细胞使用一种或多种前体用于产生所述岩藻糖基化化合物,所述前体从培养基进料给所述细胞和/或其中所述细胞产生一种或多种用于产生所述岩藻糖基化化合物的前体。 50.根据权利要求49所述的细胞,其中所述用于产生所述岩藻糖基化化合物的前体被完全转化为所述岩藻糖基化化合物。 51.根据权利要求24-50中任一项所述的细胞,其中所述细胞能够产生所述LNB、糖底物和/或乳糖。 52.根据权利要求24-51中任一项所述的细胞,其中所述细胞在细胞内产生所述岩藻糖基化化合物,并且其中所述产生的岩藻糖基化化合物一部分或基本上全部保留在细胞内和/或通过被动或主动运输被外泌到所述细胞外部。 53.根据权利要求24-52中任一项所述的细胞,其中所述细胞表达膜转运蛋白或具有转运活性的多肽,从而将化合物跨细胞壁外膜转运, 优选地,所述细胞在所述膜转运蛋白或具有转运活性的多肽的表达或活性方面被修饰。 54.根据权利要求53所述的细胞,其中所述膜转运蛋白或具有转运活性的多肽选自包括搬运蛋白、P-P键水解驱动的转运蛋白、β-桶型孔蛋白、辅助转运蛋白和磷酸转运驱动的基团易位体的列表, 优选地,所述搬运蛋白包括MFS转运蛋白、糖流出转运蛋白和铁载体输出蛋白, 优选地,所述P-P键水解驱动的转运蛋白包括ABC转运蛋白和铁载体输出蛋白。 55.根据权利要求53或54中任一项所述的细胞,其中所述膜转运蛋白或具有转运活性的多肽: -控制所述岩藻糖基化化合物和/或一种或多种用于所述产生所述岩藻糖基化化合物的前体的向细胞壁外膜的流动,和/或 -提供所述岩藻糖基化化合物的改善的产生和/或使所述岩藻糖基化化合物能够流出和/或增强的流出。 56.根据权利要求24-55中任一项所述的细胞,其中所述细胞包括至少部分失活的用于选定的单糖、二糖或寡糖的分解代谢途径,所述单糖、二糖或寡糖参与所述岩藻糖基化化合物的所述产生和/或是所述岩藻糖基化化合物的所述产生所必需的。 57.根据权利要求24-56中任一项所述的细胞,其中所述细胞在整个培养液和/或上清液中产生90g/L或更多的所述岩藻糖基化化合物和/或其中分别对整个培养液和/或上清液中的所述岩藻糖基化化合物及其前体的总量测量,整个培养液和/或上清液中的所述岩藻糖基化化合物具有至少80%的纯度。 58.根据权利要求24-57中任一项所述的细胞,其中所述细胞为细菌、真菌、酵母、植物细胞、动物细胞或原生动物细胞, -优选地,所述细菌属于选自包括以下各项的组的门:变形菌门、厚壁菌门、蓝细菌门、异常球菌-栖热菌门和放线菌门;更优选地,所述细菌属于选自包括以下各项的组的科:肠杆菌科、芽孢杆菌科、乳杆菌科、棒杆菌科和弧菌科;甚至更优选地,所述细菌选自包括以下各项的列表:大肠杆菌(Escherichia coli)菌株、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株、需钠弧菌(Vibrio natriegens)菌株;甚至更优选地,所述大肠杆菌菌株是K-12菌株,最优选地所述大肠杆菌K-12菌株是大肠杆菌MG1655, -优选地,所述真菌属于选自包括以下各项的组的属:根霉菌属、网柄菌属、青霉属、毛霉菌属或曲霉菌属, -优选地,所述酵母属于选自包括以下各项的组的属:酵母属、接合酵母属(Zygosaccharomyces)、毕赤酵母属(Pichia)、驹形氏酵母属(Komagataella)、汉逊酵母属(Hansenula)、耶氏酵母属(Yarrowia)、斯塔莫酵母属(Starmerella)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、德巴利酵母属(Debaromyces)、念珠菌属(Candida)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、许旺酵母属(Schwanniomyces)或有孢圆酵母属(Torulaspora);更优选地,所述酵母选自由以下各项组成的组:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、树干毕赤酵母(Pichia stipites)、博伊丁念珠菌(Candidaboidinii)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、西方许旺酵母(Schwanniomycesoccidentalis)、德尔布有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii)、解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)、鲁氏接合酵母(Zygosaccharomyces rouxii)和拜耳接合酵母(Zygosaccharomyces bailii), -优选地,所述植物细胞是藻类细胞或衍生自烟草、苜蓿、稻、番茄、棉花、油菜籽、大豆、玉蜀黍或玉米植物, -优选地,所述动物细胞衍生自昆虫、两栖动物、爬行动物、无脊椎动物、鱼类、鸟类或除人胚胎干细胞以外的哺乳动物细胞,更优选所述哺乳动物细胞选自包括下列各项的列表:上皮细胞、胚胎肾细胞、成纤维细胞、COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、鼠骨髓瘤细胞、NIH-3T3细胞、衍生自哺乳动物诱导性多能干细胞的乳细胞,更优选地,所述哺乳动物诱导性多能干细胞是人诱导性多能干细胞、产后乳腺上皮细胞、极性乳腺细胞,更优选地所述极性乳腺细胞选自包括以下各项的组:活的原代乳腺上皮细胞、活的乳腺肌上皮细胞、活的乳腺祖细胞、活的永生化乳腺上皮细胞、活的永生化乳腺肌上皮细胞、活的永生化乳腺祖细胞、非乳腺成体干细胞或其衍生物,更优选地所述昆虫细胞衍生自草地贪夜蛾、家蚕、甘蓝夜蛾、粉纹夜蛾或黑腹果蝇, -优选地,所述原生动物细胞是蜥蜴利士曼原虫细胞。 59.根据权利要求24-58中任一项所述的细胞,其中所述细胞产生: -带负电荷的、优选唾液酸化的、和/或中性的二糖和寡糖的混合物,所述混合物包含至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,或 -带负电荷的、优选唾液酸化的、和/或中性的寡糖的混合物,所述混合物包含至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物。 60.根据权利要求22或23中任一项所述的方法,其中所述方法包括以下步骤: i.提供根据权利要求24-59中任一项所述的细胞,以及 ii.提供GDP-岩藻糖,任选地所述GDP-岩藻糖由所述细胞产生,以及 iii.提供LNB和/或任一种或多种包含Gal-β1,3-GlcNAc的所述糖底物,任选地,所述LNB和/或任一种或多种糖底物由所述细胞产生,以及 iv.在允许表达所述岩藻糖基转移酶的条件下培养和/或孵育所述细胞,任选地在允许产生所述GDP-岩藻糖和/或LNB和/或任一种或多种所述糖基底物的条件下,从而产生所述岩藻糖基化化合物, v.优选地,将所述岩藻糖基化化合物与所述培养物分离。 61.根据权利要求22、23或60中任一项所述的方法,其中所述条件包括: -使用包含至少一种前体的培养基,所述前体用于产生所述岩藻糖基化化合物,和/或 -向所述培养基中添加至少一种前体进料,所述前体进料用于产生所述岩藻糖基化化合物。 62.根据权利要求22、23、60或61中任一项所述的方法,所述方法包括以下步骤中的至少一个: i)使用包含至少一种前体的培养基; ii)向在反应器中的所述培养基中添加至少一种前体进料,其中总反应器体积的范围为250mL(毫升)至10.000m3(立方米),优选以连续方式添加,且优选使得所述培养基的终体积是在添加所述前体进料之前培养基体积的不超过3倍、优选不超过2倍、更优选小于2倍; iii)向在反应器中的所述培养基中添加至少一种前体进料,其中总反应器体积的范围为250mL(毫升)至10.000m3(立方米),优选以连续方式添加,且优选使得所述培养基的终体积是在添加所述前体进料之前培养基体积的不超过3倍、优选不超过2倍、更优选小于2倍,且其中优选地将所述前体进料的pH设定在3.0至7.0,并且其中优选地将所述前体进料的温度保持在20℃至80℃; iv)借助于进料溶液历时1天、2天、3天、4天、5天以连续方式向所述培养基中添加至少一种前体进料; v)借助于进料溶液历时1天、2天、3天、4天、5天以连续方式向所述培养基中添加至少一种前体进料,且其中优选地将所述进料溶液的pH设定在3.0至7.0,并且其中优选地将所述前体进料溶液的温度保持在20℃至80℃; 所述方法产生所述岩藻糖基化化合物,所述岩藻糖基化化合物在最终培养物中具有至少50g/L、优选至少75g/L、更优选至少90g/L、更优选至少100g/L、更优选至少125g/L、更优选至少150g/L、更优选至少175g/L、更优选至少200g/L的浓度。 63.根据权利要求22、23、60或61中任一项所述的方法,所述方法包括以下步骤中的至少一个: i)使用培养基,所述培养基包含至少50、更优选至少75、更优选至少100、更优选至少120、更优选至少150克乳糖/升初始反应器体积,其中所述反应器体积的范围为250mL至10.000m3(立方米); ii)向培养基中添加乳糖进料,所述乳糖进料包含至少50、更优选至少75、更优选至少100、更优选至少120、更优选至少150克乳糖/升初始反应器体积,其中所述反应器体积的范围为250mL至10.000m3(立方米),优选以连续方式添加,且优选使得所述培养基的终体积是在添加所述乳糖进料之前培养基体积的不超过3倍、优选不超过2倍、更优选小于2倍; iii)向培养基中添加乳糖进料,所述乳糖进料包含至少50、更优选至少75、更优选至少100、更优选至少120、更优选至少150克乳糖/升初始反应器体积,其中所述反应器体积的范围为250mL至10.000m3(立方米),优选以连续方式添加,且优选使得所述培养基的终体积是在添加所述乳糖进料之前培养基体积的不超过3倍、优选不超过2倍、更优选小于2倍,且其中优选地所述乳糖进料的pH设定在3.0至7.0,并且其中优选地将所述乳糖进料的温度保持在20℃至80℃; iv)借助于进料溶液历时1天、2天、3天、4天、5天以连续方式向所述培养基中添加乳糖进料; v)借助于进料溶液历时1天、2天、3天、4天、5天以连续方式向所述培养基中添加乳糖进料,且其中所述乳糖进料溶液的浓度是50g/L、优选75g/L、更优选100g/L、更优选125g/L、更优选150g/L、更优选175g/L、更优选200g/L、更优选225g/L、更优选250g/L、更优选275g/L、更优选300g/L、更优选325g/L、更优选350g/L、更优选375g/L、更优选400g/L、更优选450g/L、更优选500g/L、甚至更优选550g/L、最优选600g/L;且其中优选地将所述进料溶液的pH设定在3.0至7.0,并且其中优选地将所述进料溶液的温度保持在20℃至80℃; 所述方法产生所述岩藻糖基化化合物,所述岩藻糖基化化合物在最终体积的培养物中具有至少50g/L、优选至少75g/L、更优选至少90g/L、更优选至少100g/L、更优选至少125g/L、更优选至少150g/L、更优选至少175g/L、更优选至少200g/L的浓度。 64.根据权利要求63所述的方法,其中所述乳糖进料通过以下方式完成: -从培养开始以至少5mM,优选以30、40、50、60、70、80、90、100、150mM,更优选以>300mM的浓度添加乳糖,和/或 -以一定浓度将乳糖添加到培养物中,使得在培养物的整个生产阶段中获得至少5mM,优选10mM或30mM的乳糖浓度。 65.根据权利要求22、23、60-64中任一项所述的方法,其中将所述细胞培养: -培养至少约60、80、100或约120小时或以连续方式培养,和/或 -在培养基中培养,所述培养基包含:碳源,其包含单糖、二糖、寡糖、多糖、多元醇、甘油;复合培养基,其包含糖蜜、玉米浆、蛋白胨、胰蛋白胨或酵母提取物;优选地,其中所述碳源选自包含以下各项的列表:葡萄糖、甘油、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽寡糖、麦芽三糖、山梨醇、木糖、鼠李糖、半乳糖、甘露糖、甲醇、乙醇、海藻糖、淀粉、纤维素、半纤维素、糖蜜、玉米浆、高果糖糖浆、乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐和丙酮酸盐;和/或其中,所述培养基含有至少一种选自包括以下各项的组的前体:乳糖、半乳糖、岩藻糖、唾液酸、GlcNAc、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)、LNB和N-乙酰乳糖胺(LacNAc)。 66.根据权利要求22、23、60-65中任一项所述的方法,其中通过向包含前体、优选乳糖的培养基中加入碳基底物、优选葡萄糖或蔗糖来提供第一阶段的指数细胞生长,然后是第二阶段,其中: -仅将碳基底物、优选葡萄糖或蔗糖添加到所述培养基中,或 -将碳基底物、优选葡萄糖或蔗糖和前体、优选乳糖加入到培养基中。 67.根据权利要求1-23、60-66中任一项所述的方法,其中所述方法包括分离,并且其中所述分离包括以下步骤中的至少一个:澄清、超滤、纳滤、两相分配、反渗透、微滤、活性炭或碳处理、用非离子表面活性剂处理、酶消化、切向流高效过滤、切向流超滤、亲和层析法、离子交换层析法、疏水相互作用层析法和/或凝胶过滤、配体交换层析法、电渗析。 68.根据权利要求1-23、60-67中任一项所述的方法,其中所述方法还包括纯化所述包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,优选其中所述纯化包括以下步骤中的至少一个:使用活性炭或碳、使用木炭、纳滤、超滤、电泳、酶处理或离子交换、温度调节、pH调节、用碱性或酸性溶液调节pH值、使用醇类,使用水醇混合物、结晶、蒸发、沉淀、干燥、喷雾干燥、冻干、喷雾冷冻干燥、冷冻喷雾干燥、条带式干燥、带式干燥、真空条带式干燥、真空带式干燥、转鼓式干燥、滚筒干燥、真空转鼓式干燥或真空滚筒干燥。 69.根据权利要求24-59中任一项所述的细胞在产生包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物中的用途。 70.根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法在产生包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物中的用途。 71.通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得的包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物在制造制剂、优选营养组合物、更优选药物制剂、膳食补充剂、含乳饮料或婴儿配方奶粉中的用途。 72.一种干燥粉末,包含至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,由或基本上由至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物组成,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 73.一种干燥粉末,包含至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,由或基本上由至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物组成,所述岩藻糖基化化合物可通过、优选通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 74.根据权利要求72或73中任一项所述的干燥粉末,其中所述至少一种岩藻糖基化化合物为LNFP-II、LNDFH-I或LNDFH-II。 75.根据权利要求72或73中任一项所述的干燥粉末,其中所述粉末包含LNFP-II、LNDFH-I或LNDFH-II,由或基本上由LNFP-II、LNDFH-I或LNDFH-II组成。 76.一种干燥粉末,包含哺乳动物乳寡糖(MMO)、优选至少一种带负电荷的MMO和/或至少一种中性MMO的混合物,由或基本上由哺乳动物乳寡糖(MMO)、优选至少一种带负电荷的MMO和/或至少一种中性MMO的混合物组成,其中所述混合物包含LNFP-II、LNDFH-I、LNDFH-II中的至少一种,由或基本上由LNFP-II、LNDFH-I、LNDFH-II中的至少一种组成,优选地其中所述LNFP-II、LNDFH-I和/或LNDFH-II可通过,优选通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 77.根据权利要求76所述的干燥粉末,其中所述MMO的混合物包含选自包括LNFP-I、LNFP-II、LNFP-III、LNFP-V、LNDFH-I、LNDFH-II、2'-FL、3-FL、LN3、LNT、LNnT、3'SL、6'SL、唾液酸乳糖-N-四糖(LST-a、LST-b、LST-c、LSTd)和二唾液酸乳糖-N-四糖的组的至少一种MMO。 78.一种包含至少50%w/w的包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物的干燥粉末,优选其中所述包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物是LNFP-II、LNDFH-I或LNDFH-II中的任一种,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 79.一种包含至少50%w/w的包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物的干燥粉末,所述岩藻糖基化化合物可通过,优选通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得,优选地其中所述包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物是LNFP-II、LNDFH-I或LNDFH-II中的任一种,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 80.一种干燥粉末,包含MMO的混合物,由或基本上由MMO的混合物组成,其中所述混合物包含0.1%-1%w/w的LNFP-II和3%-6%w/wLNDFH-II,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 81.一种干燥粉末,包含MMO的混合物,由或基本上由MMO的混合物组成,其中所述混合物包含0.1%-1%w/w的LNFP-II和3%-6%w/w的LNDFH-II,其中所述LNFP-II和/或所述LNFDH-II可通过,优选通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 82.一种干燥粉末,包含MMO的混合物,由或基本上由MMO的混合物组成,其中所述混合物包含0.1-20%w/w的一种或多种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 83.一种干燥粉末,包含MMO的混合物,由或基本上由MMO的混合物组成,其中所述混合物包含0.1-20%w/w的一种或多种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,所述岩藻糖基化化合物可通过根据权利要求1-23、60-68中任一项的方法获得,优选地其中所述粉末通过喷雾干燥、转鼓式干燥或滚筒干燥中的任一种进行干燥。 84.一种制剂,包含至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物,由或基本上由至少一种包含Gal-β1,3-[Fuc-α1,4]-GlcNAc的岩藻糖基化化合物组成,所述岩藻糖基化化合物可通过,优选通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得。 85.一种制剂,包含根据权利要求72-83中任一项所述的干燥粉末,由或基本上由根据权利要求72-83中任一项所述的干燥粉末组成。 86.一种制剂,包含哺乳动物乳寡糖(MMO)、优选至少一种带负电荷的MMO和/或至少一种中性MMO的混合物,由或基本上由哺乳动物乳寡糖(MMO)、优选至少一种带负电荷的MMO和/或至少一种中性MMO的混合物组成,其中所述混合物包含LNFP-II、LNDFH-I、LNDFH-II中的至少一种,优选地其中所述LNFP-II、LNDFH-I和/或LNDFH-II可通过,优选通过根据权利要求1-23、60-68中任一项所述的方法获得。 87.根据权利要求86所述的制剂,其中: -所述至少一种带负电荷的MMO是唾液酸化的MMO,优选选自包含以下各项的组:3'-唾液酸乳糖、6'-唾液酸乳糖、唾液酸乳糖-N-四糖(LST-a、LST-b、LST-c、LSTd)和二唾液酸乳糖-N-四糖,和/或 -所述至少一种中性MMO选自包含岩藻糖基化中性MMO和非岩藻糖基化中性MMO的列表,优选选自包含2'-岩藻糖基乳糖、3-岩藻基乳糖、乳糖-N-四糖、乳糖-N-新四糖、乳糖-N-岩藻五糖I、LNFP-II、LNFP-III、LNFP-V、LNDFH-I和LNDFH-II的组。 88.根据权利要求86或87中任一项所述的制剂,其中所述MMO的混合物包含LNFP-II、LNDFH-I和LNDFH-II。 89.根据权利要求86-88中任一项所述的制剂,其中所述制剂还包括至少一种益生菌微生物。 90.根据权利要求86-89中任一项所述的制剂,其中所述制剂为营养组合物,优选为药物制剂、膳食补充剂、含乳饮料或婴儿配方奶粉。
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