RNA制造的方法
本发明涉及核酸生产领域，尤其是体外RNA转录。更具体地说，本发明涉及一种方法，其中监测反应混合物的物理化学性质以及时停止反应和/或添加新鲜试剂以允许在最佳条件下继续反应。尤其是，至少在两个不同的时间点确定电导率以及pH和/或光密度，或者在体外转录反应期间连续地确定。
发明专利
CN202280044096.4
2022-06-30
CN117545841A
2024-02-09
C12N15/10(2006.01)
伊泽阿恩埃免疫疗法股份有限公司
S·迪伦;L·迪布鲁内;M·霍尔托夫
比利时尼尔
中国贸促会专利商标事务所有限公司
张小勇
比利时;BE
1.一种使用体外转录反应制造RNA的方法，其包括在所述转录反应期间至少两个不同的时间点确定电导率，其中在检测到所述至少两个时间点之间的电导率降低时，停止反应或补充新鲜试剂。 2.根据权利要求1所述的方法，其中在反应期间连续确定所述电导率，并且其中在检测到电导率的下降趋势时，停止反应或补充新鲜试剂。 3.根据权利要求1所述的方法，其中在检测到所述至少两个时间点之间电导率降低至少约2％时，停止反应或补充新鲜试剂。 4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其进一步包括在所述转录反应期间在所述至少两个不同时间点确定pH和/或光密度(OD)。 5.根据权利要求4所述的方法，其中在反应期间连续确定所述pH和/或光密度，并且其中在检测到电导率的下降趋势结合pH的稳定趋势和/或光密度的增加趋势时，停止反应或补充新鲜试剂。 6.根据权利要求4所述的方法，其中在检测到所述反应中电导率的降低结合所述至少两个时间点之间所述反应的pH的稳定和/或OD的增加时，停止反应或补充新鲜试剂。 7.根据权利要求5和6所述的方法，其中所述OD的增加为至少约2％。 8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述RNA制造以分批、连续或半连续程序进行。 9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述新鲜试剂选自包含以下的列表：NTP、封端分子、酶辅因子、酸、碱和/或pH缓冲剂。 10.在体外转录反应期间的电导率测量在RNA制造中的用途。