SMN1和miR-23a在治疗脊髓性肌萎缩中的协同效应
本申请涉及生物技术、病毒学、遗传学和分子生物学的领域。更具体而言，本发明涉及用于产生基因疗法病毒产品的分离的核酸，所述分离的核酸包含编码具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的SMN1蛋白的核酸和编码microRNA miR‑23a的核酸；基于其的表达盒和载体，以及用于在靶细胞中表达SMN1基因的基于AAV9的重组病毒，包含所述重组病毒的药物组合物，以及上述重组病毒和上述组合物的各种用途。
发明专利
CN202280025363.3
2022-01-28
CN117545842A
2024-02-09
C12N15/12(2006.01)
拜奥卡德联合股份公司
D·A·马德拉;A·S·维塞洛娃;A·S·西特金;P·M·格绍维奇;D·V·莫洛佐夫
俄罗斯联邦圣彼得堡
中国专利代理(香港)有限公司
黄登高%林毅斌
俄罗斯;RU
1.一种用于产生基因疗法病毒产品的分离的核酸，所述分离的核酸包含编码具有SEQID NO:1的氨基酸序列的SMN1蛋白(生存运动神经元蛋白)的核酸和编码microRNA miR-23a的核酸。 2.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述编码具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的SMN1蛋白的核酸包含SEQ ID NO:2的核苷酸序列。 3.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述microRNA miR-23a具有SEQ ID NO:3的核苷酸序列。 4.根据权利要求1所述的分离的核酸，其中所述编码microRNA miR-23a的核酸包含SEQID NO:4的核苷酸序列。 5.一种表达盒，其包含根据权利要求1-4中任一项所述的核酸。 6.根据权利要求5所述的表达盒，所述表达盒在5'端至3'端方向包含以下元件： 左侧(第一)ITR(反向末端重复序列)； CMV(巨细胞病毒)增强子； CMV(巨细胞病毒)启动子； hBG1基因(血红蛋白亚基γ1基因)的内含子； 编码SMN1蛋白的核酸； hGH1聚腺苷酸化信号(人生长激素基因聚腺苷酸化信号)； SV40启动子(猿猴病毒40启动子)； 编码microRNA miR-23a的核酸； SV40聚腺苷酸化信号(猿猴病毒40聚腺苷酸化信号)，和 右侧(第二)ITR。 7.根据权利要求6所述的表达盒，所述表达盒包含具有SEQ ID NO:6的核酸。 8.一种表达载体，其包含根据权利要求1-4中任一项所述的核酸或根据权利要求5-7中任一项所述的盒。 9.一种用于在靶细胞中表达SMN1基因的基于AAV9(腺相关病毒血清型9)的重组病毒，所述基于AAV9的重组病毒包含衣壳和根据权利要求5-7中任一项所述的表达盒。 10.根据权利要求9所述的基于AAV9的重组病毒，其中所述衣壳包含AAV9蛋白VP1。 11.根据权利要求10所述的基于AAV9的重组病毒，其中所述衣壳包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列的AAV9蛋白VP1。 12.根据权利要求10所述的基于AAV9的重组病毒，其中所述衣壳包含具有含一个或多个点突变的SEQ ID NO:7的氨基酸序列的AAV9蛋白VP1。 13.根据权利要求9-12中任一项所述的基于AAV9的重组病毒，其中所述衣壳包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列或含一个或多个点突变的SEQ ID NO:7的氨基酸序列的AAV9蛋白VP1，并且所述表达盒在5'端至3'端方向包含以下元件： 左侧(第一)ITR(反向末端重复序列)； CMV(巨细胞病毒)增强子； CMV(巨细胞病毒)启动子； hBG1基因(血红蛋白亚基γ1基因)的内含子； 编码SMN1蛋白的核酸； hGH1聚腺苷酸化信号(人生长激素基因聚腺苷酸化信号)； SV40启动子(猿猴病毒40启动子)； 编码microRNA miR-23a的核酸； SV40聚腺苷酸化信号(猿猴病毒40聚腺苷酸化信号)，和 右侧(第二)ITR。 14.根据权利要求10所述的基于AAV9的重组病毒，其中所述衣壳包含具有SEQ ID NO:7的氨基酸序列或含一个或多个点突变的SEQ ID NO:7的氨基酸序列的AAV9蛋白VP1，并且所述表达盒包含具有SEQ ID NO:6的核酸。 15.一种用于递送SMN1基因至靶细胞的药物组合物，所述药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的赋形剂组合的根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒。 16.根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物用于递送SMN1基因至靶细胞的用途。 17.根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物用于具有脊髓性肌萎缩和/或不具有SMN1基因的全功能拷贝的受试者的生存的用途。 18.根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物用于提供SMN1蛋白至具有脊髓性肌萎缩和/或不具有SMN1基因的全功能拷贝的受试者的用途。 19.根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物用于在具有脊髓性肌萎缩的受试者中治疗脊髓性肌萎缩的用途。 20.一种用于在具有运动神经元病症的受试者中调节运动功能的方法，所述方法包括施用治疗有效量的根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物至所述受试者的细胞中。 21.一种用于向具有脊髓性肌萎缩的受试者提供SMN蛋白的方法，所述方法包括施用治疗有效量的根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物至有需要的受试者的细胞中。 22.一种用于递送SMN1基因至具有脊髓性肌萎缩的受试者的靶细胞的方法，所述方法包括施用根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物至所述受试者的细胞中。 23.一种用于在受试者中治疗脊髓性肌萎缩的方法，所述方法包括施用治疗有效量的根据权利要求9-14中任一项所述的基于AAV9的重组病毒或根据权利要求15所述的组合物至具有脊髓性肌萎缩的受试者。