sgRNA及其在制备用于治疗亨廷顿舞蹈症的产品中的应用
本发明涉及一种sgRNA及其在制备用于治疗亨廷顿舞蹈症的产品中的应用。本发明通过研究设计筛选得到了核苷酸序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的靶向人源HTT基因1号外显子的sgRNA，基于该sgRNA及与其同源性较高sgRNA的CRISPR/Cas9系统HTT基因敲除方案能够高效地敲除人源亨廷顿基因，实现对亨廷顿舞蹈症的基因治疗。
发明专利
CN202211005017.7
2022-08-22
CN117603965A
2024-02-27
C12N15/113(2010.01)
北京脑神康科技开发中心(有限合伙)
李沉简;郑素双
100089 北京市海淀区中关村南大街17号3号楼13层1308
华进联合专利商标代理有限公司
戴志攀
北京;11
1.一种sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列包括： 如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列； 或与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列具有至少95％同源性，且具有相同功能的核苷酸序列； 或由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列经1～6个碱基缺失、替代或增加得到，且具有相同功能的核苷酸序列。 2.根据权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列为与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列具有至少98％同源性，且具有相同功能的核苷酸序列。 3.根据权利要求1所述的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA的核苷酸序列为由SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列在5’末端或3’末端经1～3个碱基缺失、替代或增加得到，且具有相同功能的核苷酸序列。 4.一种DNA片段，其特征在于，所述DNA片段编码权利要求1～3任一项所述的sgRNA。 5.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求4所述的DNA片段。 6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体还含有Cas核酸内切酶编码序列片段。 7.根据权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于，所述Cas核酸内切酶编码序列为SaCas9核酸内切酶编码序列、SpCas9核酸内切酶编码序列、Cas12a核酸内切酶编码序列、Cas12b核酸内切酶编码序列、Cas12e核酸内切酶编码序列、Cas12j核酸内切酶编码序列、Cas12f1核酸内切酶编码序列、Cas13a核酸内切酶编码序列或Cas14a核酸内切酶编码序列。 8.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘病毒载体、杆状病毒载体、乳头瘤病毒载体或乳头多瘤空泡病毒载体。 9.根据权利要求8所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为AAV9病毒载体。 10.一种病毒，其特征在于，所述病毒的基因组中含有编码权利要求1～3任一项所述的sgRNA的核苷酸序列。 11.根据权利要求10所述的病毒，其特征在于，所述病毒为慢病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒或乳头多瘤空泡病毒。 12.根据权利要求10所述的病毒，其特征在于，所述病毒为AAV9病毒。 13.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞的基因组中含有权利要求4所述的DNA片段或权利要求5～9任一项所述的重组表达载体。 14.根据权利要求13所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为CHO细胞、COS细胞、NSO细胞、HeLa细胞、BHK细胞或HEK293T细胞。 15.权利要求1～3任一项所述的sgRNA、权利要求4所述的DNA片段、权利要求5～9任一项所述的重组表达载体、权利要求10～12任一项所述的病毒或权利要求13～14任一项所述的宿主细胞在制备用于治疗亨廷顿舞蹈症的产品中的应用。 16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂、试剂盒、药物或装置。 17.一种用于治疗亨廷顿舞蹈症的药物，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的sgRNA、权利要求4所述的DNA片段、权利要求5～9任一项所述的重组表达载体、权利要求10～12任一项所述的病毒或权利要求13～14任一项所述的宿主细胞，以及可药用的辅料。 18.根据权利要求17所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为针剂。 19.根据权利要求17所述的药物，其特征在于，所述辅料包括稀释剂、防腐剂、缓冲剂、崩解剂、抗氧剂、助悬剂、着色剂和赋形剂中的一种或多种。 20.一种HTT基因敲除方法，其特征在于，包括以下步骤：在目的细胞中外源表达权利要求1～3任一项所述的sgRNA，以及Cas核酸内切酶。 21.一种亨廷顿舞蹈症的治疗方法，其特征在于，包括以下步骤：将Cas核酸内切酶系统和权利要求1～3任一项所述的sgRNA递送入患病个体的大脑纹状体和皮层区域。 22.根据权利要求21所述的治疗方法，其特征在于，所述递送的方式为脑立体定位注射。