DNA检测方法和DNA检测系统
本发明的一个实施方式为一种DNA检测方法，其包括：将含有荧光标记探针或DNA嵌入剂和多种检测对象的DNA的检测体溶液分割成多个微小组分的第一工序；在包含上述微小组分的微小分区中进行核酸扩增反应的第二工序；在各个上述微小分区中，伴随温度变化，测定来自上述荧光标记探针或上述DNA嵌入剂的荧光强度的第三工序；根据上述测定得到的各荧光强度计算上述检测对象的DNA的熔解温度的第四工序；确定受到了气泡的影响的上述微小分区的第五工序；和从上述多个微小分区得到的总数据除去上述受到了气泡的影响的上述微小分区的数据的第六工序。
发明专利
CN202180099075.8
2021-06-07
CN117642516A
2024-03-01
C12Q1/6844(2006.01)
株式会社日立高新技术
田中淳子;中川树生;石田猛;香村惟夫
日本东京都
北京尚诚知识产权代理有限公司
龙淳%程采
日本;JP
1.一种DNA检测方法，其特征在于，包括： 将含有荧光标记探针或DNA嵌入剂和多种检测对象的DNA的检测体溶液分割成多个微小组分的第一工序； 在包含所述微小组分的微小分区中进行核酸扩增反应的第二工序； 在各个所述微小分区中，伴随温度变化，测定来自所述荧光标记探针或所述DNA嵌入剂的荧光强度的第三工序； 根据所述测定得到的各荧光强度计算所述检测对象的DNA的熔解温度的第四工序； 确定受到了气泡的影响的所述微小分区的第五工序；和 从所述多个微小分区得到的总数据除去所述受到了气泡的影响的所述微小分区的数据的第六工序。 2.如权利要求1所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第五工序中，作为所述受到了气泡的影响的所述微小分区，确定为根据第三工序中测定得到的各荧光强度制作的熔解曲线的微分曲线的峰数为规定值以上的微小分区。 3.如权利要求1或2所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第五工序中，在相邻的2个以上的所述微小分区被确定为所述受到了气泡的影响的所述微小分区时，在第六工序中，将该相邻的2个以上的所述微小分区的数据除去，且 在第五工序中，在单独的所述微小分区被确定为所述受到了气泡的影响的所述微小分区时，在第六工序中，不除去该单独的所述微小分区的数据。 4.如权利要求1所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第五工序中，通过所述微小分区的图像的解析来确定所述受到了气泡的影响的所述微小分区。 5.如权利要求1所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第五工序中，选择根据第三工序测定得到的各荧光强度制作的熔解曲线的微分曲线的峰数为规定值以上的微小分区，通过所述选择的微小分区的图像的解析确认是否受到所述气泡的影响，由此确定所述受到了气泡的影响的所述微小分区。 6.如权利要求5所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第五工序中，在相邻的2个以上的所述微小分区中，选择所述微分曲线的峰数为规定值以上的微小分区，且 在第五工序中，在单独的所述微小分区中，不选择所述微分曲线的峰数为规定值以上的微小分区。 7.如权利要求1～6中任一项所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第一工序中，所述DNA溶液被极限稀释。 8.如权利要求1～7中任一项所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第四工序中，在所述各微小分区中，根据所述熔解温度，判断所述多个检测对象的DNA的种类， 在第五工序中，对于判断了种类的所述DNA的各种类，进一步根据表示规定的基准熔解温度的信息确定所述微小分区。 9.如权利要求1～8中任一项所述的DNA检测方法，其特征在于： 所述微小分区由以阵列状排列的孔或分散在油中的微滴构成。 10.如权利要求1～9中任一项所述的DNA检测方法，其特征在于： 在第四工序中，所述熔解温度作为根据第三工序中测定得到的各荧光强度制作的熔解曲线的拐点算出。 11.一种DNA检测系统，其特征在于，包括： 具有用于加入含有荧光标记探针或DNA嵌入剂的DNA溶液的多个微小分区的第一装置； 用于拍摄第一装置的图像的第二装置； 为了在所述微小分区中进行核酸扩增反应，用于调整所述微小分区的温度的第三装置； 在所述微小分区中，为了获得伴随温度变化而变化的荧光强度，使所述拍摄装置拍摄图像的、用于控制拍摄装置的第四装置；和 用于根据获得的所述微小分区的所述荧光强度探测气泡的产生的第五装置。